人參重茬地根際土壤真菌多樣性及其群落動態(tài)變化研究.pdf

1、人參(Panax ginseng C.A.Meyer)，是我國馳名中外的名貴藥材之一，具有重要的藥用價值。由于人參屬于忌地性極強的植物，已嚴重制約人參產(chǎn)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。研究分析得出，連作障礙關(guān)鍵因素在于土壤中細菌、真菌等生物不規(guī)律變化，尤其是真菌對植物危害嚴重。本實驗利用DGGE技術(shù)、基因克隆及基因文庫建立的方法對不同年限和不同采樣季節(jié)的人參根際土壤真菌種群數(shù)及其群落變化的特異性進行分析，以期為人參主要病害的預(yù)防工作、人參病害的病理研究

2、及開發(fā)綠色環(huán)保的微生物制劑奠定一定的理論和實驗基礎(chǔ)。研究的主要結(jié)論如下：
　　1、確立了人參重茬地根際土壤真菌 PCR反應(yīng)體系，即25uL體系中包含5uL模板（100ng/uL），2.5uL10×Buffer緩沖液，2uL dNTPs(各2.5 mM)，上下游引物（10 uM）各1uL，1.5uL Mg2+（25 mM），0.4uL Taq酶（5 U/uL）。并篩選適于DGGE指紋圖譜分析的引物FF390-FR1(GC)。

3、　　2、研究結(jié)果表明不同種植年限的人參根際土壤真菌在種群數(shù)、優(yōu)勢種及群落的動態(tài)變化方面都有較大區(qū)別。人參根際土壤真菌與非根際土壤真菌在多樣性指數(shù)，優(yōu)勢種，特有種群及群落動態(tài)變化上也明顯不同。種群數(shù)、優(yōu)勢種都隨著種植年限的提高而增加，當種植到一定期限后挖去人參，土壤根際土壤真菌種群的多樣性指數(shù)又略有下降。通過測序結(jié)果得出，重茬地一年生人參未發(fā)現(xiàn)鐮刀霉屬，說明了枯萎病是在多年種植的人參地塊上發(fā)生。
　　3、不同采樣季節(jié)的人參根際土壤真

4、菌的種群數(shù)，優(yōu)勢種及其群落動態(tài)變化也有較大差異。不同季節(jié)都能發(fā)現(xiàn)其相應(yīng)的優(yōu)勢種群和特有種群。這可以從另一面說明不同病原菌或?qū)θ藚⒉『ζ鹱饔玫恼婢后w對人參的作用時間有差異。
　　4、通過差異條帶克隆及構(gòu)建18S rDNA多變區(qū)文庫的方法檢測到DGGE未測得的微生物序列，彌補了微生物信息的丟失。通過構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹可以清楚的看到人參重茬地真菌系統(tǒng)發(fā)育狀況，找到與未被培養(yǎng)真菌相似性較高的菌種和對人參主要病害起作用的病原種群，為尚未培養(yǎng)真