二氧化硅刺激的離體A549細胞AQP-1、AQP-4表達研究.pdf

1、目的:研究二氧化硅(SiO2)刺激的人II型肺泡上皮細胞系A549細胞所構造的矽肺早期急性肺損傷模型中水通道蛋白1(AQP-1)和水通道蛋白4(AQP-4)的表達及意義。
　　方法:
　　1.將培養(yǎng)的生長良好的對數(shù)生長期人II型肺泡上皮細胞系A549細胞分為對照組、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h染塵組和抑制劑組，各染塵組分別以質量濃度為50mg/L的SiO2混懸液刺激0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 h，抑

2、制劑組先分別以濃度為200μmol/L的AQP-1抑制劑HgCl2孵育3min(即檢測AQP-1 mRNA相對表達水平的抑制劑組）或濃度為100μmol/L的AQP-4抑制劑TGN-020孵育2.0h(即檢測AQP-4 mRNA相對表達水平的抑制劑組），再以質量濃度為50mg/L的SiO2混懸液刺激1.0h，另設不予任何處理的對照組；采用實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Real-time PCR）法檢測AQP-1和AQP-4 mRNA的相對

3、表達水平。
　　2.將A549細胞分為對照組、3.0、6.0、12.0、24.0h染塵組和抑制劑組，各染塵組分別以質量濃度為50mg/L的SiO2混懸液分別刺激3.0、6.0、12.0、24.0h，抑制劑組先分別以濃度為200μmol/L的AQP-1抑制劑HgCl2孵育3min(即檢測AQP-1蛋白表達水平的抑制劑組）或濃度為100μmol/L的AQP-4抑制劑TGN-020孵育2.0h(即檢測AQP-4蛋白表達水平的抑制劑組），

4、再以質量濃度為50mg/L的SiO2混懸液刺激6.0h，另設不予任何處理的對照組；分別采用免疫印跡法和免疫細胞化學法檢測AQP-1和AQP-4的蛋白表達。
　　3.采用SPSS19.0軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料經正態(tài)性檢驗符合正態(tài)分布，以x±s表示；多組組間均數(shù)比較采用單因素方差分析（One-way ANOVA），均數(shù)間兩兩比較采用LSD法；以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1.Real-time

5、 PCR法分析結果顯示：與對照組相比，SiO2刺激后A549細胞AQP1和AQP-4 mRNA相對表達水平均呈現(xiàn)先升高后逐漸下降的趨勢，均于SiO2刺激1.0h達高峰(P＜0.01)，于SiO2刺激8.0h趨于正常水平(P＞0.05)。
　　2.免疫細胞化學法示AQP-1和AQP-4于A549細胞的胞漿和胞核中均有表達。
　　3.免疫印跡法和免疫細胞化學法定量分析結果均顯示：與對照組相比，SiO2刺激后A549細胞AQP-1

6、和AQP-4蛋白相對表達水平均呈現(xiàn)先升高后逐漸下降的趨勢，均于SiO2刺激6.0h達高峰(P＜0.01)，但于SiO2刺激24.0h后仍未下降至正常水平(P＜0.01)。4抑制劑組AQP-1和AQP-4 mRNA相對表達水平及蛋白表達水平均高于對照組，但均低于SiO2刺激相同時間的染塵組(P＜0.01)。
　　結論：SiO2刺激使A549細胞AQP-1和AQP-4的表達增高，AQP-1和AQP-4的特異性抑制劑可分別減弱SiO2刺