非諾貝特對心衰能量代謝的影響.pdf

1、目的：目前心衰的治療已取得了巨大的進展，死亡率明顯降低，但在控制心衰的進展方面仍存不足，研究表明心肌能量代謝障礙在其中起了重要作用，本實驗旨在探討異丙腎上腺素致大鼠慢性心力衰竭過程中過氧化物酶體增殖物激活受體α(PPARα)配體非諾貝特的作用及與心肌能量代謝的關系。
　　 方法：⑴構建大鼠心衰模型：雄性SD大鼠隨機分為4組，對照組10只，心衰組每組20只，體重200-300g，(1)對照組：每日皮下注射等量生理鹽水1次，為期4周

2、；(2)小劑量ISO(isoproterenol，ISO)組：每日皮下注射ISO1次，劑量為2 mg/kg/d；(3)中劑量ISO組：每日皮下注射ISO1次，劑量為2.5mg/kg/d；(4)大劑量ISO組：每日皮下注射ISO1次，劑量為3mg/kg/d，4周末評估各組大鼠存活率，通過心臟彩超、測血清BNP值、計算心臟體重指數(shù)評價四組大鼠心功能，摸索構建大鼠心衰模型的最佳劑量。⑵雄性SD大鼠30只，體重200-300g，隨機分為3組(n

3、=10)：1、對照組：常規(guī)喂養(yǎng)，每日皮下注射等量生理鹽水；2、非諾貝特保護組(FF組)：常規(guī)喂養(yǎng)，F(xiàn)F組給予含非諾貝特的混懸液灌胃，給藥量100mg/kg/d(給藥劑量參考文獻)，連續(xù)4周，后給予皮下注射ISO(2.5mg/kg/d)為期4周；3、ISO損傷組：常規(guī)喂養(yǎng)，給予皮下注射ISO(2.5mg/kg/d)為期4周。⑶于第2、3、4周各組大鼠以0.3％戊巴比妥鈉溶液(10ml/kg)腹腔注射麻醉后備皮，進行超聲檢測，檢測左室舒張末

4、內徑(LVEDD)、左室收縮末內徑(LVESD)、左室射血分數(shù)(LVEF)、左室縮短分數(shù)(FS)。⑷于第2、3、4周抽頸總動脈處插管取各組大鼠眼球取血測BNP。⑸4周末，全部大鼠在全麻下，于頸總動脈處插管取血離心后獲得血清，解剖出心臟，各組選取部分心臟標本于10％甲醛中固定24h，常規(guī)取材、脫水、石蠟包埋，沿左室長軸線每隔1mm橫斷面切取3張切片，HE染色，光學顯微鏡下觀察，余各組大鼠心肌組織于液氮中保存。⑹光學顯微鏡下觀察大鼠心肌病理

5、形態(tài)改變。⑺用預冷的生理鹽水洗去心臟殘留血液，剪去周圍結締組織和血管，濾紙吸干水分稱量心臟濕重。心臟重量指數(shù)=心臟濕重/體重。⑻ELISA法測定大鼠血清BNP和參考游離脂肪酸試劑盒方法檢測血清游離脂肪酸(FFA)含量。⑼參考游離脂肪酸試劑盒方法檢測心肌組織中游離脂肪酸含量，分光光度法檢測心肌組織中乳酸和丙酮酸含量，Western blot檢測PPARα、UCP2蛋白的表達。
　　 結果：①注射劑量為3mg/kg/d組4周末大鼠死

6、亡14只，注射劑量為2 mg/kg/d無大鼠死亡，2.5 mg/kg/d組4周末大鼠死亡2只，大、中、小劑量組存活率分別為30％、90％及100％。與對照組相比，ISO造模組LVEDD、LVESD、BNP及心臟重量指數(shù)均高于對照組，LVEF、FS低于對照組(組間比較P均<0.01)。ISO造模組LVEDD、LVESD、BNP及心臟重量指數(shù)隨著ISO劑量的增加而增大(組間比較P均<0.01)，LVEF、FS隨著ISO劑量的增加而降低(組間

7、比較P均<0.05)，3mg/kg/d大劑量組較2.5 mg/kg/d組盡管心衰程度更嚴重，但存活率明顯降低，心衰模型的成功建立以ISO皮下注射劑量為2.5 mg/kg/d較為適宜。②4周末，F(xiàn)F保護組、ISO損傷組的LNEDD、LVESD明顯大于對照組(P<0.05)，與FF保護組相比較，ISO損傷組的LVEDD、LVESD明顯增大(P<0.05)；FF保護組、ISO損傷組的LVEF、FS明顯低于對照組(P<0.05)，與FF保護組相

8、比較，ISO損傷組的LVEF、FS明顯降低(P<0.05)。③與對照組、FF保護組相比，ISO損傷組心肌細胞肥大，部分心肌細胞有嗜酸變性和(或)壞死，病變呈灶性或彌散性分布，部分大鼠心肌間質結締組織增生，增生的結締組織呈條索狀，F(xiàn)F保護組心肌細胞肥大及心肌間質結締組織增生均較ISO組更輕。④FF保護組與ISO損傷組心臟重量指數(shù)(3.16±0.12、3.58±0.08)與對照組(2.13±0.15)比較均有顯著性差異，(均P<0.05)，

9、與FF保護組相比，ISO損傷組心臟重量指數(shù)明顯增高(P<0.01)。⑤FF保護組與ISO損傷組血清BNP(1.79±0.09、4.86±0.12)與對照組(0.39±0.03)比較均有顯著性差異，(均P<0.01)，與FF保護組相比，ISO損傷組血清BNP明顯增高(P<0.01)。⑥FF保護組與ISO損傷組血清FFA及心肌FFA均顯著高于對照組(均P<0.01)，與FF保護組相比，ISO損傷組血清FFA及心肌FFA明顯增高(均P<0.0

10、5)。⑦FF保護組與ISO損傷組心肌乳酸、丙酮酸均顯著高于對照組(均P<0.01)，與FF保護組相比，ISO損傷組心肌乳酸、丙酮酸明顯增高(均P<0.05)。⑧FF保護組與ISO損傷組心肌組織PPARα(614.13±87.08、160.34±14.12)與對照組(1586.69±93.44)比較均有顯著性差異(均P<0.01)，與FF保護組相比，ISO損傷組血清PPARα明顯降低(P<0.01)。⑨FF保護組與ISO損傷組心肌組織UC

11、P2(637.28±73.14、1217.09±81.88)與對照組(435.56±63.18)比較均有顯著性差異(均P<0.01)，與FF保護組相比，ISO損傷組血清UCP2明顯增高(P<0.01)。
　　 結論：⑴在慢性心衰的進展過程中，存在心肌脂肪酸的利用障礙以及線粒體的氧化磷酸化解偶聯(lián)導致能量生成減少。⑵過氧化物酶體增殖型受體激活物非諾貝特可通過上調心肌PPARα的表達，減少血清游離脂肪酸含量，進一步減少心肌UCP2的表