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文檔簡介
1、目的:腦缺血可引起腦組織水腫,神經(jīng)細胞壞死、凋亡,導(dǎo)致腦功能障礙。MAPK(促有絲分裂蛋白激酶)家族可分為以下三組:ERK、JNK、(C-Jun氨基末端激酶)以及P38MAPK(胞外信號調(diào)節(jié)酶)。有研究表明,MAPK在腦缺血再灌注損傷后被激活,這些激酶信號通路被認(rèn)為是造成腦缺血再灌注后致腦損傷的重要分子成份。另外,目前國內(nèi)外研究表明非諾貝特具有腦保護作用,其保護機制是否與調(diào)節(jié)JNK,ERK信號通路有關(guān)尚不清楚。本實驗研究非諾貝特對大鼠局
2、灶性腦缺血再灌注損傷的影響,并評價JNK,C—Jun氨基未端激酶和胞外信號調(diào)節(jié)酶(ERK)在非諾貝特產(chǎn)生的神經(jīng)保護中起的作用。 方法:采用大腦中動脈線栓法(MACO)建立大鼠局灶性腦缺血再灌注模型, 60只成年SD大鼠,體重220克~250克,被隨機分為三組:假手術(shù)組(n=20),腦缺血再灌注組(IR組,n=20):非諾貝特預(yù)治序組(n=20)。動物模型制備:采用線栓法,大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉,用特制的尼龍線阻斷大腦中
3、動脈血流,2小時后抽出栓線,形成再灌注,假手術(shù)組僅暴露頸總動脈及分叉處,不插入阻斷大腦中動脈。各組動物術(shù)中均用加熱板使其肛溫保持在37℃左右,術(shù)后單籠飼養(yǎng)。假手術(shù)組再灌注6小時后處死,1R組再灌注22小時后處-夕匕。非諾貝特預(yù)治療組在模型制作前14天用非諾貝特喂養(yǎng)。 本實驗(1)測定梗死面積:各組大鼠處死后斷頭取腦,立即做冠狀切片,放入2%TTC磷酸鹽緩沖液中染色,各個腦片攝像,用HPIAS-1000圖像分析軟件計算出梗死而積。
4、(2)NDS神經(jīng)功能缺損評分(3)腦組織含水量測定:再灌注22小時后,根據(jù)Gotoh’sformala方法:腦組織含水量(%)=(濕重.干重)/濕重×100%。(4)腦組織病理觀察:光鏡下觀察所有切片,HE染色,在J E M-1200E電子顯微鏡下觀察。 (5)TUNEL檢測碉亡細胞數(shù):玻片脫臘、乙醇水化,滴加TUNEL染色緩沖液,DAB顯色后,在光鏡44倍下選擇具有代表性的視野,計數(shù)1mm<'2>陽性細胞數(shù)。(6)免疫組織化學(xué)法和免疫
5、印跡法檢測ERK和JNK的活性,免疫印跡法檢測Bcl-2和BaX的表達。取出全腦,分離出背側(cè)海馬約100毫克,勻漿后超聲粉碎,離心,轉(zhuǎn)膜,用過氧化物酶標(biāo)記的二抗孵育,X光片上的顯色條帶進行光密度掃描半定量分析。 結(jié)果:同假手術(shù)組比較,IR組腦梗死體積,神經(jīng)功能評分,腦組織含水量,凋亡細胞數(shù)有顯著性差異。非諾貝特組與IR組比較顯著降低了上述指標(biāo),在分子水平上,顯著增加了JNK和ERK的表達活性,同時增加了Bax和Bcl-2基因的表
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