JNK信號通路對小膠質細胞功能及其表面TNFR的影響.pdf

1、目的:在前期實驗中，我們通過對不同時間低氧培養(yǎng)的小膠質細胞(BV2細胞)的功能狀態(tài)研究，發(fā)現(xiàn)BV2細胞在低氧培養(yǎng)1小時和12小時下分別起到神經(jīng)保護和神經(jīng)損傷的作用。本實驗將進一步探討B(tài)V2細胞JNK信號通路對小膠質細胞功能及腫瘤壞死因子受體(TNFR)表達的影響。
　　 方法:以小鼠小膠質細胞瘤(BV2細胞株)及大鼠嗜鉻細胞瘤(PC12細胞株)為研究對象，分別用來代表小膠質細胞和神經(jīng)元。將BV2細胞實驗分組為:正常對照組（常氧組

2、）、低氧1h組、低氧1h+SP600125組、低氧12h組、低氧12h+SP600125組。應用westernblot檢測低氧下BV2細胞JNK信號通路阻斷劑SP600125最佳阻斷濃度。然后在不同程度低氧及有無SP600125干預下培養(yǎng)BV2細胞，用其培養(yǎng)液來培養(yǎng)PC12細胞，通過CCK-8法測定PC12細胞存活率并以此來反映BV2細胞功能，同時應用westernblot檢測BV2細胞TNF-α受體TNFR1與TNFR2表達情況，應用

3、ELISA法檢測在不同功能狀態(tài)下BV2細胞分泌表達TNF-α、IL-1β、NGF情況。
　　 結果:
　　 1.正常對照組和損傷對照組PC12細胞的存活率分別為:100％和52.37％;BV2細胞低氧培養(yǎng)1h時，PC12細胞的存活率為75.96％，加入SP600125后PC12細胞存活率增加到81.88％，差異有顯著性(P＜0.01);BV2細胞低氧培養(yǎng)12h時，PC12細胞的存活率為36.87％，加入SP600125后

4、PC12細胞存活率可達57.61％，差異有顯著性(P＜0.01)。
　　 2.在正常情況下，BV2細胞表面無TNFR1表達，僅有少量TNFR2表達。在低氧培養(yǎng)1h時，TNFR2表達增多，加入SP600125能進一步增加TNFR2的表達(P＜0.05);在低氧培養(yǎng)12h時，TNFR1的表達增多，加入SP600125能進一步減少TNFR1的表達(P＜0.05)。
　　 3.BV2細胞在常氧培養(yǎng)下，其分泌的TNF-α、IL-1

5、β、NGF分別為447.77±7.62pg/ml、4.38±0.29pg/ml和122.19±4.94pg/ml;BV2細胞經(jīng)低氧培養(yǎng)1h，其分泌的TNF-α、IL-1β、NGF均有所增加，分別為612.19±15.06pg/ml、15.22±0.73pg/ml和214.22±5.19pg/ml;當?shù)脱跖囵B(yǎng)12h，TNF-α和IL-1β水平增加到1265.24±14.36pg/ml、22.87±1.03pg/ml，而NGF的水平則下降到