小鼠肝臟中絲氨酸、蘇氨酸和賴(lài)氨酸乙酰化修飾的蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、蛋白質(zhì)中氨基酸的乙酰化修飾是一種可逆的在真核細(xì)胞和原核細(xì)胞中都能發(fā)生的翻譯后修飾形式,參與調(diào)控多種生物學(xué)過(guò)程,如DNA-蛋白質(zhì)相互作用、蛋白質(zhì)一蛋白質(zhì)相互作用、基因轉(zhuǎn)錄、蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性、細(xì)胞的遷移和分化等。自1968年Vidali發(fā)現(xiàn)了第一個(gè)乙?；鞍踪|(zhì)以來(lái),科學(xué)家對(duì)氨基酸的乙?；揎椷M(jìn)行了大量的研究,研究重點(diǎn)主要集中于賴(lài)氨酸殘基的乙?；揎?已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了300多個(gè)賴(lài)氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì),然而,相比生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)而言,發(fā)現(xiàn)的乙酰化蛋白質(zhì)

2、仍然只是冰山一角,賴(lài)氨酸乙酰化底物的缺乏已經(jīng)成了研究賴(lài)氨酸乙?；揎椀钠款i,限制了與賴(lài)氨酸乙酰化修飾相關(guān)的生物學(xué)功能的研究。近年來(lái),蛋白質(zhì)組學(xué)的方法已被作為一種高通量的有效的方法用于研究蛋白質(zhì)及其翻譯后修飾形式。用HPLC分離免疫親和純化得到乙?；鞍踪|(zhì)或肽段,然后用MS/MS進(jìn)行鑒定,是一個(gè)理想的研究賴(lài)氨酸乙?；揎椀姆椒?。
　　 除了賴(lài)氨酸殘基的乙?；揎?2006年Orth等人在研究耶爾森菌屬中的細(xì)菌毒力因子YopJ(Ye

3、rsiniaspecieseffectorprotein)時(shí),發(fā)現(xiàn)YopJ是一種乙?；D(zhuǎn)移酶,能夠使mitogen-activatedproteinkinasekinases(MAPKK)中的絲氨酸和蘇氨酸殘基發(fā)生乙?；揎棥０l(fā)生乙?；揎椀慕z氨酸和蘇氨酸殘基位于MAPKK的活性鏈上,這兩個(gè)位點(diǎn)發(fā)生乙?；揎椇?同樣的位點(diǎn)上便不能發(fā)生磷酸化修飾,從而無(wú)法激活mitogen-activatedproteinkinase(MAPK)信號(hào)通路

4、,抑制免疫應(yīng)答。因此,絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎椌哂兄匾纳飳W(xué)功能。目前研究絲氨酸和蘇氨酸乙?；揎椀姆椒ㄓ邢?由于難以得到絲氨酸、蘇氨酸乙?；揎椀目贵w,運(yùn)用免疫親和純化技術(shù)預(yù)先分離和富集絲氨酸和蘇氨酸乙酰化蛋白或肽段的方法暫時(shí)難以實(shí)現(xiàn)。
　　 針對(duì)目前乙?；揎椦芯康默F(xiàn)狀及存在的問(wèn)題,本論文從蛋白質(zhì)組學(xué)的角度對(duì)小鼠肝臟中的絲氨酸、蘇氨酸和賴(lài)氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì)進(jìn)行了研究,共包括以下四部分內(nèi)容:
　　 第一章前言

5、部分概述了目前蛋白質(zhì)組學(xué)和翻譯后修飾蛋白質(zhì)組學(xué)的研究現(xiàn)狀,尤其對(duì)蛋白質(zhì)乙?；揎椀难芯窟M(jìn)展做了很好的綜述,說(shuō)明了本論文的選題目的及意義。
　　 第二章運(yùn)用shotgun技術(shù)對(duì)小鼠肝臟中的絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎椀鞍踪|(zhì)進(jìn)行分析,這是首次運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)的方法對(duì)絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎椷M(jìn)行分析。共在60個(gè)乙?；鞍踪|(zhì)中鑒定到63個(gè)乙酰化位點(diǎn),其中包括絲氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì)30個(gè),共33個(gè)位點(diǎn);蘇氨酸乙酰化蛋白質(zhì)22個(gè),共2

6、2個(gè)位點(diǎn)。這些絲氨酸和蘇氨酸乙酰化蛋白質(zhì)均為首次發(fā)現(xiàn)可以發(fā)生絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎棥＝柚镄畔W(xué)工具對(duì)這些乙?；揎椀鞍踪|(zhì)進(jìn)行功能分析、氨基酸序列進(jìn)行分析等。挑選具有重要生物學(xué)功能的乙?；鞍踪|(zhì)進(jìn)行克隆表達(dá),證明絲氨酸、蘇氨酸的乙?；揎椩谏矬w內(nèi)的存在。我們的發(fā)現(xiàn)表明與賴(lài)氨酸殘基的乙酰化修飾一樣,絲氨酸和蘇氨酸殘基的乙?；揎椏赡苁切∈蟾闻K中廣泛存在的翻譯后修飾形式,具有潛在的重要的生物學(xué)功能。
　　 第三章運(yùn)用免疫

7、親和純化技術(shù)結(jié)合nano-HPLC/MS/MS技術(shù),對(duì)小鼠肝臟中的賴(lài)氨酸殘基乙?；揎楇亩芜M(jìn)行富集、鑒定,并對(duì)鑒定到的賴(lài)氨酸乙?；揎椀鞍踪|(zhì)進(jìn)行了功能分析、氨基酸序列分析。共在20個(gè)賴(lài)氨酸乙酰化修飾蛋白質(zhì)中鑒定到21個(gè)賴(lài)氨酸乙?；揎椢稽c(diǎn),其中12個(gè)蛋白質(zhì)和16個(gè)位點(diǎn)為首次被鑒定到可以發(fā)生乙酰化修飾。另外,發(fā)現(xiàn)了三個(gè)能夠發(fā)生乙?；揎椀囊阴；D(zhuǎn)移酶,對(duì)于進(jìn)一步研究賴(lài)氨酸的乙?；揎椩诙喾N細(xì)胞過(guò)程中的生物學(xué)功能有重要意義。