卡托普利對(duì)大鼠早期酒精性肝病的治療作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：建立大鼠酒精性脂肪性肝病模型，探究卡托普利對(duì)其療效及可能存在的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：127只大鼠，隨機(jī)分為2個(gè)組：正常組13只，造模組114只，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后開(kāi)始造模。造模組給予酒精灌胃，第一周35％食用酒精0.8ml·100g-1，正常組給予等容積生理鹽水，每天兩次(上午9點(diǎn)和下午3點(diǎn))。之后造模組每周增加5％濃度的食用酒精，劑量仍為0.8ml·100g-1，每天兩次，正常組不變。當(dāng)?shù)谒闹軡舛仍黾拥?0％時(shí)，發(fā)現(xiàn)大鼠開(kāi)始

2、大批死亡，于是第五周開(kāi)始恢復(fù)到45％濃度，之后一直保持此濃度，劑量仍為0.8ml·100g-1，每天兩次。造模六周后，隨機(jī)抽取4只大鼠，進(jìn)行肝臟病理檢測(cè)，證實(shí)造模組大鼠有酒精性肝炎和少量脂肪肝形成。將造模組剩余的92只大鼠隨機(jī)分成5個(gè)組，模型組19只，卡托普利高劑量組19只，卡托普利中劑量組18只，卡托普利低劑量組18只，水飛薊賓陽(yáng)性對(duì)照組18只，繼續(xù)45％食用酒精灌胃，劑量仍為0.8ml·100g-1，每天兩次，同時(shí)按成人和大鼠體表面

3、積等效劑量折算開(kāi)始灌胃給藥，持續(xù)六周。卡托普利高劑量組給予卡托普利2.7mg·100g-1(相當(dāng)于成人等效劑量的2倍)，卡托普利中劑量組給予卡托普利1.35mg·100g-1(相當(dāng)于成人等效劑量)，卡托普利低劑量組給予卡托普利0.675mg·100g-1(相當(dāng)于成人等效劑量1/2)，水飛薊賓陽(yáng)性對(duì)照組給予水飛薊賓3.78mg·100g-1(相當(dāng)于成人等效劑量)，每天于兩次酒精灌胃間隙給藥一次(中午12點(diǎn));正常組及模型組大鼠給予等容積生

4、理鹽水。所有大鼠在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中均自由進(jìn)食，自由飲水。第12周灌胃結(jié)束后，所有大鼠均禁食不禁飲12小時(shí)，稱重，用1％戊巴比妥鈉(0.4ml·100g-1)進(jìn)行麻醉，腹主動(dòng)脈取血3-5ml裝入生化采血管，分離血清，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)其谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine aminotransferase,ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspartate aminotransferase，AST)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipop

5、rotein cholesterol，HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterin，LDL-C);分離肝臟稱重，計(jì)算肝指數(shù);取相同部位肝組織甲醛固定，蘇木精-伊紅染色法(hematoxylin-eosin staining，HE)染色，放置于200倍光鏡下，分析其病理學(xué)變化;另取相同部位肝臟組織，冰水浴下用生理鹽水做成10％肝組織勻漿，用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)總膽固醇(Total

6、 cholesterol，TC)、甘油三酯(Triglyceride，TG)水平，用酶聯(lián)免疫吸附劑測(cè)定法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)測(cè)定核轉(zhuǎn)錄因子(nuclear factor-k-gene binding,NF-κb)和腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor-α，TNF-α)水平，用紫外可見(jiàn)分光光度法(Uv visible spectrophotometry.me

7、thod,UV-Vis)測(cè)定丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性(Glutathione peroxidase，GSH-Px)水平，用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot，WB)檢測(cè)肝組織中CYP2E1蛋白表達(dá)程度。
　　結(jié)果：模型組肝濕重、肝指數(shù)、TC、TG、ALT、AST、LDL-C、MDA含量、NF-κb、TNF-α、肝組織CYP2E1的蛋白表達(dá)水平均增高，HDL-C含量和GSH-Px活

8、性均下降，與正常組比較，差異顯著(P＜0.05)?？ㄍ衅绽邉┝拷M肝濕重、肝指數(shù)、TC、TG、ALT、AST、GGT、LDL-C、MDA含量、NF-κb、TNF-α、肝組織CYP2E1的蛋白表達(dá)水平均降低，HDL-C含量和GSH-Px活性均提高，與模型組比較，差異顯著(P＜0.05);陽(yáng)性對(duì)照組與模型組對(duì)比，肝濕重、肝指數(shù)、TC、TG、ALT、AST、GGT、LDL-C、MDA含量、NF-κb、TNF-α、肝組織CYP2E1的蛋白表達(dá)水

9、平均降低，HDL-C含量和GSH-Px活性均提高，差異顯著(P＜0.05)。肝臟檢查顯示，正常組大鼠肝細(xì)胞形態(tài)正常，肝血竇及門管區(qū)清晰，肝小葉呈發(fā)散狀向四周整齊排列，包漿均勻，未見(jiàn)變性及壞死。模型組大鼠肝細(xì)胞腫大，排列散亂，匯管區(qū)內(nèi)有纖維組織增生，伴有炎細(xì)胞浸潤(rùn)，大部分肝細(xì)胞發(fā)生脂肪變，以汽球樣肝細(xì)胞水樣變性為主，有大小不一的脂滴空泡，將細(xì)胞核擠壓在一邊，胞漿疏松，呈網(wǎng)狀半透明?？ㄍ衅绽蛣┝拷M情況與模型組相似，但細(xì)胞水腫及脂肪變性程度

10、要略低。卡托普利中劑量組肝細(xì)胞腫大，排列紊亂，胞漿疏松呈網(wǎng)狀半透明，但脂肪變性有所減輕，細(xì)胞水腫減少，脂滴空泡數(shù)量累及區(qū)域減少;卡托普利高劑量組大鼠肝細(xì)胞輕微腫大，排列稍紊亂，脂肪變性及細(xì)胞水腫不明顯，有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn)，肝索呈放射狀，圍繞在中央靜脈周圍，包漿較為緊密，脂滴空泡數(shù)量明顯減少，主要為小脂滴;水飛薊賓陽(yáng)性對(duì)照組與卡托普利高劑量組相似。
　　結(jié)論：SD雄性大鼠的早期酒精性肝病模型復(fù)制成功。實(shí)驗(yàn)表明卡托普利能減輕大鼠酒精性肝