姜黃素調(diào)控分型介導的巨噬細胞對創(chuàng)面愈合的影響.pdf

1、目的：本課題利用單核細胞定向誘導分化技術獲得不同表型巨噬細胞（M1、M2），用不同濃度姜黃素對 M1型巨噬細胞進行誘導干預，通過細胞懸液創(chuàng)周局部注射的手段對大鼠創(chuàng)傷模型進行差異化處理，并通過若干愈合指標、細胞因子的測定，討論不同濃度姜黃素誘導的 M1型巨噬細胞后對創(chuàng)面愈合的影響。
　　方法：提取大鼠股骨骨髓細胞，并通過差速貼壁、M-CSF刺激等方法純化、激活獲得實驗所需的巨噬細胞,應用流式細胞技術分析培養(yǎng)細胞結果。使用LPS刺激巨

2、噬細胞M0向M1轉化，IL-4誘導巨噬細胞M0向M2轉化，并應用流式細胞技術分析驗證M1、M2誘導的有效性。應用不同濃度姜黃素誘導M1型巨噬細胞向M2型巨噬細胞極化并獲得相應細胞混懸液；應用流式細胞技術分析姜黃素對 M1誘導的極化效率，大鼠創(chuàng)傷模型的制備及其可用性的評價。實驗大鼠背部制作6枚直徑6mm全層皮膚貫通傷模型，通過創(chuàng)面愈合率、HE染色分析評價所制模型的可用性。創(chuàng)面的實驗條件干預及評價：實驗動物分1天組、4天組、7天組、10天組

3、、14天組5組，每組5只。按照隨機雙盲的原則分別對每只大鼠的六枚創(chuàng)面做如下處理：①局部（皮下、真皮層及創(chuàng)基浸潤，同下）注射注射滅菌PBS；②局部注射M1+Cur0組細胞懸液；③⑥不做任何處理；④局部注射M1+Cur25組細胞懸液；⑤局部注射M2+Cur0組細胞懸液。到達實驗天數(shù)后，處死實驗鼠取標本進行愈合相關指標的檢測、分析。通過創(chuàng)面未愈面積宏觀描述愈合速率的差異，HE染色、MASSON染色、免疫組化微觀分析導致愈合速率差異存在的原因。

4、
　　結果：
　　1.大鼠骨髓細胞培養(yǎng)CD45、CD68雙陽性細胞比率可達86.5%。
　　2.姜黃素刺激M1型巨噬細胞向M2型巨噬細胞極化的最佳作用濃度為25μmol/L，極化效率為29.59%。
　　3.大鼠背部不同解剖位置的六枚創(chuàng)面愈合速率無統(tǒng)計學差異，HE染色結果無明顯差異。相對于空白對照組，M1+Cur0組創(chuàng)面可觀察到愈合延遲，HE染色及MASSON染色提示創(chuàng)面存在炎細胞浸潤時間長、肉芽組織生長緩慢；創(chuàng)

5、面愈合率、免疫組化（VEGF、bFGF、TGF-β1）定量分析提示相關指標較空白對照組存在統(tǒng)計學差異。M2+Cur0組及 M1+Cur25組創(chuàng)面可觀察到愈合提前，上述指標分析結果與M1+Cur0組相反且存在統(tǒng)計學意義。PBS組與空白對照組間無統(tǒng)計學差異。
　　結論：
　　1.M-CSF可體外誘導大鼠骨髓細胞形成巨噬細胞。
　　2.LPS、IL-4分別可誘導巨噬細胞向M1、M2極化。
　　3.姜黃素可誘導M1型巨噬