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文檔簡介
1、目的:
分離、培養(yǎng)、鑒定小鼠骨髓間充質干細胞(Mesenchymal stem cells，MSCs);利用Transwell共培養(yǎng)體系驗證轉染CX3CR1基因對小鼠MSCs向趨化因子Fractalkine(FKN)趨化能力的影響。
方法:
全骨髓差速貼壁法分離純化原代小鼠MCSs，體外培養(yǎng)、傳代擴增獲得穩(wěn)定傳代的小鼠MCSs后以流式細胞術鑒定細胞。將攜帶有趨化因子受體CX3CR1基因及綠色熒光蛋白(gre
2、en fluorescent protein，GFP)基因的慢病毒（LV-CX3CR1-EGFP）及空載體病毒(LV-CON-EGFP)轉染小鼠MCSs細胞，采用RT-PCR法、Western印記法檢測目的CX3CR1在各組小鼠MCSs中的表達。熒光顯微鏡觀察在Transwell小室中，不同組小鼠MCSs細胞向趨化因子FKN的遷移情況。
結果:
獲得了穩(wěn)定傳代、細胞形態(tài)均一、生長狀態(tài)良好的小鼠MCSs;細胞CD29、
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