西黃丸及拆方藥味抑瘤作用和機制的實驗研究.pdf

1、目的：1.探討西黃丸和乳香、沒藥、乳香沒藥藥對（乳沒藥對）對惡性腫瘤細(xì)胞株（人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、人肺癌細(xì)胞株NCI-H460)體外增殖的影響；并探討西黃丸和乳香、沒藥、乳沒藥對對人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7的基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）的影響；2.進(jìn)一步探討乳沒藥對體內(nèi)外抑瘤作用，并考察其對腫瘤細(xì)胞中受體型酪氨酸激酶（RTKs）的影響。
　　方法：1.西黃丸、乳香、沒藥、乳沒藥對的體外抑瘤作

2、用的比較：①將不同濃度西黃丸、乳香、沒藥、乳沒藥對浸提液，直接加入含腫瘤細(xì)胞的96孔培養(yǎng)板中培養(yǎng)48小時后，采用MTT法，測定其對三種人惡性腫瘤細(xì)胞株(人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、人肺癌細(xì)胞株NCI-H460)增殖的影響。②將4mg/ml的西黃丸、乳香、沒藥、乳沒藥對浸提液，加入含人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7細(xì)胞的24孔培養(yǎng)板中，7天后取其上清液和細(xì)胞裂解液，采用Western blot方法，分別測定西黃丸

3、、乳香、沒藥、乳沒藥對對人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）表達(dá)的影響。
　　2.乳沒藥對的抑瘤實驗研究：①體外實驗：采用MTT法，將不同濃度乳沒藥對浸提液直接加入含腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)板中培養(yǎng)48小時后，測定其對2種人惡性腫瘤細(xì)胞株（人原發(fā)性肝癌細(xì)胞株SMMC7721、人早幼粒細(xì)胞白血病細(xì)胞株HL－60）增殖的影響，同時采用ELISA檢測方法檢測其對腫瘤細(xì)胞RTKs活性的影響；②體內(nèi)實驗：用移植性荷瘤H22小鼠模型，接

4、種3天后，荷瘤小鼠被隨機分為5組，并灌胃給不同劑量的乳沒藥對浸提液10天，于第10天后，分離取出腋下腫瘤組織，進(jìn)行稱重，并計算抑瘤率，同時采用ELISA檢測方法檢測腫瘤組織中RTKs的活性。
　　結(jié)果：1.西黃丸、乳香、沒藥、乳沒藥對的體外抑瘤作用的比較：①西黃丸、乳香、沒藥、乳沒藥對浸提液與人惡性腫瘤細(xì)胞株(人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7、人乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231、人肺癌細(xì)胞株NCI-H460)作用48h后，對其增殖有一定的

5、抑制作用（P<0.05；P<0.01），且都隨濃度的上升，其抑制率上升，呈劑量依賴關(guān)系。②4mg/ml的西黃丸、乳香、沒藥、乳沒藥對在對人乳腺癌細(xì)胞株作7天后，西黃丸對其MMP-9的表達(dá)和對照組相比有明顯差異性（P<0.05），而乳香、沒藥、乳沒藥對對MMP-9的表達(dá)無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　2.乳沒藥對的抑瘤實驗研究：①體外實驗：乳沒藥對浸提液在10mg/ml-20mg/ml對兩種腫瘤細(xì)胞的增殖均表現(xiàn)出明顯的抑瘤作用，

6、對2種腫瘤細(xì)胞的受體酪氨酸激酶活性也有明顯的抑制作用（P<0.05；P<0.01）；②體內(nèi)實驗：乳沒藥對在1.08g/kg和2.16g/kg劑量下對H22荷瘤小鼠腫瘤生長有明顯的抑制作用，對腫瘤組織中受體酪氨酸激酶活性也有明顯的抑制作用（P<0.05；P<0.01）。
　　結(jié)論：西黃丸、乳香、沒藥、乳沒藥對均有一定抗腫瘤作用，且對乳腺癌細(xì)胞株具有一定的特異性，乳沒藥對可能為其主要抑瘤成分，乳沒藥對的抑瘤機理可能與抑制腫瘤細(xì)胞內(nèi)受體