沙眼衣原體感染血清學免疫優(yōu)勢蛋白的篩選與優(yōu)化.pdf

1、沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis, C.t)引起的泌尿生殖道感染目前已成為國內外最常見的性傳播疾病之一[1]。沙眼衣原體感染引起的并發(fā)癥較多且較嚴重，該感染還顯著增加HIV感染的危險性，并且可能與宮頸癌的形成有關[1]。其感染的另一個重要特點是癥狀隱匿，感染者往往成為重要儲主和傳染源，為控制沙眼衣原體感染，早期發(fā)現(xiàn)沙眼衣原體感染者并給與治療，防止進一步傳播是重要舉措之一。
　　目前我國臨床上廣泛使用的沙眼衣原

2、體檢測試劑盒針對的抗原多數是脂多糖(Lipopolysaccharides，Lps)，主要外膜蛋白(Major Outer Oembrane Protein， MOMP)或熱休克蛋白60(Heat Shock Protein60,HSP60)[2]。然而Lps缺乏特異性，和其他病原體的Lps抗原具有一定的交叉反應。近年來越來越多的研究顯示MOMP和HSP60雖有較好的抗原性和特異性，但不屬抗原性最強的前20種蛋白之列，因此用于檢測的敏感

3、性不夠，可能導致誤診[3]。為了尋找更適合沙眼衣原體感染篩查的方法，本實驗選取近年來國外陸續(xù)報道的了8種沙眼衣原體免疫優(yōu)勢蛋白進行蛋白的表達、驗證，以MOMP和HSP60為對照，收集臨床沙眼衣原體感染者和未感染者的血清，ELISA方法檢測血清中抗所表達衣原體抗原的抗體，尋找適用于我國早期篩查沙眼衣原體感染的抗原蛋白組合。
　　目的：表達衣原體質粒編碼蛋白3（Pgp3）、衣原體蛋白酶樣活性因子（CPAF）、C.t143編碼蛋白（CT

4、143）、C.t101編碼蛋白（CT101）、C.t694編碼蛋白（CT694）、C.t875編碼蛋白（CT875）、C.t813編碼蛋白（CT813）、C.t119編碼蛋白（IncA）8種沙眼衣原體免疫優(yōu)勢蛋白，以MOMP和HSP60為對照，檢測泌尿生殖道沙眼衣原體感染者血清中10種沙眼衣原體蛋白的IgG抗體，比較上述幾種蛋白的抗原性，確定具有最高敏感性和特異性的抗原蛋白組合。優(yōu)化適用于沙眼衣原體感染血清學篩查的免疫優(yōu)勢蛋白的組合。<

5、br>　　方法：將編碼上述10種蛋白的基因重組質粒轉化入大腸桿菌感受態(tài)BL-21， IPTG誘導目的蛋白的表達，GST Magbeads進行蛋白鑒定，用獲取的蛋白裂解液包被ELISA96孔板。收集天津醫(yī)科大學總醫(yī)院性病門診沙眼衣原體感染者血清50份和未感染者血清30份，ELISA法檢測血清中的相應特異性IgG抗體，將該結果與血清學微量免疫熒光檢測和生殖道分泌物沙眼衣原體細胞培養(yǎng)兩種傳統(tǒng)金標準作比較[3-4]。
　　結果：
　

6、　1.本研究完成了對 pGEX-6p-2/Pgp3、pGEX-6P-2/CPAF、pGEX-6P-2/CT143、pGEX-6P-2/CT101、pGEX-6P-2/CT694、pGEX-6P-2/CT875、pGEX-6P-2/CT813、pGEX-6P-2/MOMP、pGEX-6P-2/IncA和pGEX-6P-2/HSP6010種重組質粒及pGEX-6p-2空載體質粒的提取、鑒定和測序。
　　2.本研究完成了 GST-Pgp

7、3、GST-CPAF、GST-CT143、GST-CT101、GST-CT694、GST-CT875、GST-CT813、GST-MOMP、GST-IncA、GST-HSP6010種融合蛋白及空質粒GST蛋白的表達、純化和鑒定。
　　3.50份C.t感染者血清中10種沙眼衣原體蛋白的抗體檢出情況： Pgp3抗體88％（44/50）、CPAF抗體76%（38/50）、CT143抗體74%（37/50）、CT101抗體72%（36/5

8、0）、CT694抗體66%（33/50）、CT875抗體62%（31/50）、CT813抗體60%(30/50）、MOMP抗體52%（26/50）、IncA抗體48%（24/50）和HSP60抗體34%（17/50）；30份沙眼衣原體未感染者標本中10種沙眼衣原體蛋白的抗體檢出情況：CT143抗體26.7%(8/30)、CT101抗體16.7%（5/30），其余8種抗體均未檢出。
　　4.50份沙眼衣原體感染者標本中，微量免疫熒光

9、檢測陽性44例，陰性6例；細胞培養(yǎng)陽性14例，陰性36例。30份沙眼衣原體未感染者標本中，微量免疫熒光檢測結果與細胞培養(yǎng)檢測結果均為陰性。
　　5.沙眼衣原體Pgp3、CT694和CT875這3種免疫優(yōu)勢蛋白組合的血清學實驗結果和微量免疫熒光、沙眼衣原體細胞培養(yǎng)的陽性符合率分別達到97.73%(43/44)和92.86%(13/14)。30份MIF檢測陰性血清標本中未檢出上述三種蛋白的抗體。
　　結論：
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