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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
近視是目前最常見的屈光不正,中國(guó)青少年的近視率已達(dá)到了90%,嚴(yán)重情況下,近視導(dǎo)致的眼球變形的伸展和眼內(nèi)部結(jié)構(gòu)的變薄,增加了視網(wǎng)膜脫離、白內(nèi)障、青光眼甚至失明的風(fēng)險(xiǎn),成為不容小覷的公共衛(wèi)生問題。多巴胺作為眼中重要的神經(jīng)遞質(zhì),在屈光發(fā)育過程中起著重要的調(diào)控作用。不少研究表明多巴胺 D1受體和D2受體參與近視的發(fā)生發(fā)展,但其具體作用部位、機(jī)制仍未明了。本研究主要采用組織特異性敲除小鼠動(dòng)物模型來探究多巴胺D1受體(DRD1)
2、和多巴胺D2受體(DRD2)在近視發(fā)生發(fā)展中的作用部位,進(jìn)一步闡明近視發(fā)生的機(jī)制。
方法:
Drd1flox/flox(D1f/f)小鼠和Drd2flox/flox(D2f/f)小鼠分別與Six3-Cre雜交,繁殖出所需要的視網(wǎng)膜特異性DRD1敲除小鼠:實(shí)驗(yàn)組D1f/f Cre+小鼠,對(duì)照組D1f/f Cre-小鼠;視網(wǎng)膜特異性DRD2敲除小鼠:實(shí)驗(yàn)組D2f/f Cre+小鼠,對(duì)照組D2f/f Cre-小鼠。與 S1
3、00a4-Cre雜交,繁殖出所需要的成纖維細(xì)胞特異性 DRD1敲除小鼠:實(shí)驗(yàn)組D1f/f Cre+小鼠,對(duì)照組D1f/f Cre-小鼠;成纖維細(xì)胞特異性DRD2敲除小鼠:實(shí)驗(yàn)組D2f/f Cre+小鼠,對(duì)照組D2f/f Cre-小鼠。實(shí)驗(yàn)分別在正常視覺環(huán)境和形覺剝奪(FD)條件下進(jìn)行。正常視覺環(huán)境下的小鼠在出生后第4、6、8周利用ERI、OCT測(cè)量小鼠的屈光、眼軸等眼球生物學(xué)參數(shù),在出生后第5周利用Micro IV進(jìn)行眼底拍照,第7周檢
4、測(cè)其ERG,第8周ERI、OCT測(cè)量結(jié)束后取小鼠視網(wǎng)膜、角膜、晶體、鞏膜檢測(cè)DRD1/DRD2的表達(dá)量。形覺剝奪條件下的小鼠在出生后第4周給予右眼形覺剝奪2周或者4周處理。
結(jié)果:
1.視網(wǎng)膜DRD1敲除小鼠的視網(wǎng)膜DRD1表達(dá)量明顯降低,敲除效率為94.3%,屈光向遠(yuǎn)視方向偏移,眼底無明顯變化,明適應(yīng)和暗適應(yīng)下ERG的a波、b波振幅均顯著降低。2.視網(wǎng)膜DRD2敲除小鼠的視網(wǎng)膜DRD2表達(dá)量明顯降低,敲除效率為93
5、.6%,屈光向遠(yuǎn)視方向偏移,眼底、ERG均無明顯變化,對(duì)FDM無明顯影響。3.成纖維細(xì)胞DRD2敲除小鼠的鞏膜、晶體DRD2表達(dá)量均降低,鞏膜敲除效率為60.5%,晶體敲除效率為39.5%,屈光向近視方向偏移,對(duì)FDM無明顯影響。
結(jié)論:
1.Six-Cre小鼠的屈光發(fā)育正常,Cre重組酶的表達(dá)不影響小鼠的正常屈光發(fā)育;2.視網(wǎng)膜多巴胺D1受體是正視化的必要條件,D1受體缺失引發(fā)遠(yuǎn)視;3.視網(wǎng)膜多巴胺 D2受體是正視
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