廣東地區(qū)土壤中暗色真菌的分布和生態(tài)研究.pdf

1、暗色真菌是一組孢子和菌絲的壁具有黑色素樣顏色的真菌，是廣泛存在于自然界的腐生寄生生物，主要寄生于朽木、枯草等腐敗植物及土壤中，一般不引起人類感染。當人類皮膚破損或免疫功能低下時，可導致人體皮膚組織和內臟器官深部真菌感染，引起著色芽生菌病、暗色絲孢霉病和足菌腫等，近來也常有免疫功能正常者被感染的報道。該菌種類繁多，對常用抗真菌藥不敏感，危害嚴重，如皮炎外瓶霉在全球范圍內廣泛分布，主要引起亞洲人中樞神經系統(tǒng)感染，病情兇險，常致人死亡。研究發(fā)

2、現(xiàn)，環(huán)境中的病原菌是致病的唯一來源，暗色真菌所致疾病的發(fā)病情況也存在明顯的地域差異，以馬達加斯加、巴西發(fā)病率最高，且病原菌多以裴氏著色真菌為主。我國以山東章丘及河南部分地區(qū)發(fā)病率較高，北方以卡氏枝孢霉為主，南方以裴氏著色霉多見。廣東地處熱帶及亞熱帶地區(qū)，北回歸線橫貫大陸中部，自然條件復雜多樣，土壤中真菌含量豐富，廣東也是暗色真菌病的高發(fā)地區(qū)，廣州、湛江、吳川、深圳、佛山等地都相繼有暗色真菌病發(fā)病的報道，但廣東地區(qū)土壤中重要的致病性暗色真

3、菌的分布情況尚未見報道，廣東自然環(huán)境中暗色真菌的分布與臨床發(fā)病的關系如何也未見報道。明確這類真菌在自然內環(huán)境中的分布及生態(tài)，對于研究暗色真菌所致疾病的病因、病機及預防，掌握其流行規(guī)律，監(jiān)測菌種變遷具有重要的意義。本研究擬采集廣東地區(qū)有代表性的土壤樣本，分離鑒定暗色真菌，以明確廣東地區(qū)土壤中暗色真菌的位置分布，菌種構成及生態(tài)特點，為進一步研究暗色真菌的致病性及與臨床發(fā)病的關系打下基礎。 目的： 1.分離并鑒定廣東地區(qū)土壤中

4、的暗色真菌，明確本地區(qū)土壤中暗色真菌的分布及生態(tài)。 2.探討分子生物學的方法在菌種鑒定方面的現(xiàn)實意義。 方法： 1.分層隨機抽樣確定采樣點，非概率方便抽樣采集樣本：將廣東省按地理位置分為3個氣候帶，中亞熱帶、南亞熱帶、北熱帶，每個氣候帶隨機取2-4個采樣點，每個點采集10-20份土壤樣本。 2.土壤中暗色真菌的分離方法：利用PDA及孟加拉紅培養(yǎng)基，采用改進的稀釋平板法分離培養(yǎng)土壤中的暗色真菌。 3

5、.真菌的鑒定方法：采用形態(tài)學鑒定和分子生物學方法鑒定相結合的方法鑒定所分離的菌株。 4.統(tǒng)計方法：利用計算機統(tǒng)計軟件包SAS8.1對各變量進行統(tǒng)計學分析。 結果： 1.367份土壤樣本共分離出21屬36種71株暗色真菌，其中17株為致病性暗色真菌。 2.71株暗色真菌于南亞熱帶西部地區(qū)種的豐度和密度均最高(分別為0.25、1.92)，南亞熱帶東部最低(分別為0.16、0.18)。 3.廣東17個縣

6、市均分出暗色真菌，南至湛江徐聞，北至韶關樂昌，東至汕頭陸豐，西至肇慶云浮，其中種的豐度和密度最大的為陽江(分別為0.54、5.3)，分出菌株種類最多的為珠海11個種。 4.廣東土壤中致病性暗色真菌主要有3個屬，依次為：外瓶霉屬、枝孢瓶霉屬、枝孢霉屬；非致病性暗色真菌最多的屬為線狀黑粉菌屬。 5.廣東土壤中暗色真菌棲息的位置環(huán)境為田地、山坡、路旁、圈養(yǎng)場、小溪邊。 6.改良的馬鈴薯、孟加拉紅培養(yǎng)基分離暗色真菌的效率

7、高，PDA 70％(56／80)，孟加拉紅67.5％(54／80)。培養(yǎng)基中放線菌酮濃度為200 mg／L時分離率最高，PDA 87.5％(14／16)，孟加拉紅81.25％(13／16)，與無放線菌酮的培養(yǎng)基比較(PDA 31.25％(5／16)，孟加拉紅37.5％(6／16))有顯著性差異(P<0.05)。樣品液中不加放線菌酮等抗生素時，傾注法比涂布法分離效率高，PDA分別為80％(16／20)和40％(8／20)，孟加拉紅分別為8

8、0％(16／20)和30％(6／20)，各自比較均有顯著性差異(P<0.05)。 7.形態(tài)學鑒定與分子分子生物學方法鑒定相符合，全部菌株均由DNA測序后Genbank Blast比對后鑒定得出。 結論： 1.廣東地區(qū)土壤中暗色真菌的分布廣泛，普遍存在，但西南部多于東北，暗色真菌棲息的位置環(huán)境無特殊； 2.廣東地區(qū)土壤中致病性暗色真菌以外瓶霉及枝孢霉為主，非致病菌以線狀黑粉菌為主； 3.馬鈴薯培養(yǎng)基