大豆異黃酮抗疲勞作用及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　1.應(yīng)用建立的小鼠負(fù)重游泳動(dòng)物模型，觀察補(bǔ)充大豆異黃酮對(duì)小鼠游泳耐力的作用（抗疲勞的作用），確定大豆異黃酮抗疲勞作用的劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　2.研究補(bǔ)充大豆異黃酮對(duì)負(fù)重游泳小鼠能量代謝、抗氧化功能方面的作用，探討大豆異黃酮抗疲勞作用機(jī)制。
　　方法：
　　1.選用雄性昆明小鼠40只，根據(jù)體重隨機(jī)分為4組，每組10只小鼠，以AIN-93M飼料喂養(yǎng)小鼠14d，2％負(fù)重游泳0（正常組）、30、60、120 m

2、in，采用血清生化分析方法和1H NMR代謝組學(xué)技術(shù)，分析小鼠負(fù)重游泳過(guò)程中血清某些疲勞標(biāo)志物的變化，確定適宜的游泳時(shí)間和可敏感反映機(jī)體疲勞狀況的指標(biāo)，作為機(jī)體的疲勞生物標(biāo)志物，并以此為切入點(diǎn)，展開(kāi)進(jìn)一步的研究。
　　2.選用雄性昆明小鼠40只，根據(jù)體重隨機(jī)分為4組:分別記為對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)SI1組、2組、3組，每組10只小鼠，對(duì)照組小鼠喂以AIN-93M合成飼料，實(shí)驗(yàn)組小鼠在正常飼料基礎(chǔ)上每千克飼料中補(bǔ)充添加2g、4g、8g的大豆異

3、黃酮，喂養(yǎng)14d之后，四組小鼠分別按體重2％負(fù)重游泳至力竭，觀察各組小鼠游泳耐力情況，比較各組小鼠的游泳力竭時(shí)間，確定大豆異黃酮抗疲勞作用的劑量效應(yīng)關(guān)系。
　　3.選用雄性昆明小鼠30只，根據(jù)體重隨機(jī)分為3組:分別記為正常組、對(duì)照組和SI0.4組，正常組、對(duì)照組喂以AIN-93M合成飼料，SI0.4組喂以在此基礎(chǔ)上補(bǔ)充4g/kg的大豆異黃酮飼料，喂養(yǎng)14d，對(duì)照組和SI0.4組小鼠按2％體重負(fù)重游泳60min，然后斷頭處死所有小鼠

4、，取血分離血清，取肝臟、大腿骨骼肌，分別測(cè)定血糖、血乳酸、血清尿素氮含量(BUN)，血清和肝臟、骨骼肌中游離脂肪酸含量(NEFA)、肝糖元、肌糖元含量，肝臟、骨骼肌中琥珀酸脫氫酶(SDH)、ATP酶、肌酸激酶(CK)活性，血清和肝臟、骨骼肌谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化物酶(SOD)活性等抗氧化功能相關(guān)指標(biāo)。
　　4.選用雄性昆明小鼠30只，根據(jù)體重隨機(jī)分為3組:分別記為正常組、對(duì)照組、和SI0

5、.4組，正常組、對(duì)照組喂以AIN-93M合成飼料，SI04組喂以在此基礎(chǔ)上補(bǔ)充4g/kg的大豆異黃酮飼料，喂養(yǎng)14d，對(duì)照組和SI0.4組小鼠按2％體重負(fù)重游泳60min，然后斷頭處死所有小鼠，差速離心法分離骨骼肌線(xiàn)粒體，測(cè)定線(xiàn)粒體呼吸鏈酶復(fù)合體功能、膜流動(dòng)性、膜電位、呼吸功能、通透性轉(zhuǎn)換孔開(kāi)放（腫脹率）、ATP酶活性等線(xiàn)粒體功能指標(biāo)以及T-AOC、GSH-Px、SOD、MDA等抗氧化功能指標(biāo)。
　　結(jié)果：
　　1.血清代謝

6、組學(xué)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明:隨著負(fù)重游泳時(shí)間的延長(zhǎng)，小鼠血清代謝出現(xiàn)規(guī)律性變化，主要表現(xiàn)在乳酸、尿素氮和脂類(lèi)相關(guān)代謝產(chǎn)物增加，血糖降低。血清生化分析結(jié)果與代謝組學(xué)結(jié)果有較好的一致性，變化規(guī)律基本相同。與正常組相比，小鼠負(fù)重游泳60min血清代謝變化比較明顯，并且數(shù)據(jù)離散趨勢(shì)要小于120min，適合作為下一步實(shí)驗(yàn)研究的觀察時(shí)間，因此下一步實(shí)驗(yàn)將游泳時(shí)間確定為60min。
　　2.補(bǔ)充大豆異黃酮對(duì)小鼠負(fù)重游泳耐力的影響:正常組小鼠游泳力竭時(shí)間為

7、75.5min，飼料中補(bǔ)充2g/kg劑量組游泳力竭時(shí)間是85.6min，補(bǔ)充4g/kg劑量組游泳力竭時(shí)間是105.8min，補(bǔ)充8g/kg劑量組游泳力竭時(shí)間是88.1min，可見(jiàn)飼料中補(bǔ)充4g/kg劑量大豆異黃酮組的小鼠游泳力竭時(shí)間最長(zhǎng)，抗疲勞效果在3個(gè)劑量組中相對(duì)最好，因此下一步實(shí)驗(yàn)將大豆異黃酮的添加量確定為4g/kg飼料。
　　3.補(bǔ)充大豆異黃酮對(duì)游泳小鼠能量代謝及抗氧化功能產(chǎn)生顯著影響。對(duì)照組小鼠負(fù)重游泳后，血乳酸含量較正常

8、組顯著升高，補(bǔ)充大豆異黃酮組小鼠較正常組有所升高，但與游泳對(duì)照組比較，卻顯著降低。小鼠負(fù)重游泳后BUN水平也顯著升高，補(bǔ)充大豆異黃酮使其顯著降低;補(bǔ)充大豆異黃酮后，小鼠血清和肝、骨骼肌組織中游離脂肪酸含量顯著升高，說(shuō)明在大豆異黃酮的調(diào)控作用下，使得小鼠運(yùn)動(dòng)過(guò)程中能源物質(zhì)來(lái)源構(gòu)成發(fā)生明顯改變，可能是通過(guò)減少蛋白質(zhì)或氨基酸的消耗，增加脂肪的動(dòng)員和利用的途徑，為機(jī)體提供能量，這對(duì)于提高機(jī)體運(yùn)動(dòng)耐力具有重要意義。另外補(bǔ)充大豆異黃酮還可提高肝臟組

9、織SDH活性和肝臟、骨骼肌組織CK、ATP酶活性，說(shuō)明大豆異黃酮可能對(duì)三羧酸循環(huán)具有調(diào)節(jié)作用，增加了運(yùn)動(dòng)過(guò)程中機(jī)體能量的供給，有助于延緩疲勞的發(fā)生。此外補(bǔ)充大豆異黃酮還可降低骨骼肌中氧化應(yīng)激產(chǎn)物MDA的含量，提高骨骼肌和肝臟組織中的T-AOC、SOD、GSH-Px活性，這對(duì)于減輕運(yùn)動(dòng)所致氧化應(yīng)激損傷是十分有利的。
　　4.補(bǔ)充大豆異黃酮對(duì)游泳小鼠骨骼肌線(xiàn)粒體功能具有保護(hù)作用。小鼠負(fù)重游泳后骨骼肌線(xiàn)粒體呼吸鏈酶復(fù)合體活性、線(xiàn)粒體膜電

10、位和膜流動(dòng)性都有不同程度的下降，影響了線(xiàn)粒體的正常生理功能，能量合成可能會(huì)有所下降，機(jī)體供能受到一定影響，補(bǔ)充大豆異黃酮后又有所恢復(fù)，改善了線(xiàn)粒體的功能，有利于機(jī)體運(yùn)動(dòng)過(guò)程的能量的供給。小鼠負(fù)重游泳后骨骼肌線(xiàn)粒體ATP酶活性顯著降低，補(bǔ)充大豆異黃酮又有一定程度的改善，說(shuō)明大豆異黃酮對(duì)運(yùn)動(dòng)過(guò)程中骨骼肌線(xiàn)粒體能量代謝具有某種調(diào)節(jié)作用，有利于ATP的合成，提高機(jī)體運(yùn)動(dòng)耐力，延緩疲勞的發(fā)生。與對(duì)照組相比，補(bǔ)充大豆異黃酮后，小鼠運(yùn)動(dòng)后骨骼肌線(xiàn)粒體

11、中T-AOC、SOD、GSH-Px都有不同水平的提高，MDA含量降低，表明線(xiàn)粒體抗氧化損傷的能力增強(qiáng)，氧化損傷產(chǎn)物的生成減少，有利于減輕運(yùn)動(dòng)過(guò)程中的氧化應(yīng)激損傷。通過(guò)調(diào)節(jié)線(xiàn)粒體功能和提高線(xiàn)粒體的抗氧化應(yīng)激損傷能力這可能是其發(fā)揮抗疲勞作用的重要機(jī)制。
　　結(jié)論：
　　本研究采用的雄性昆明小鼠建立負(fù)重游泳模型，應(yīng)用此模型觀察了大豆異黃酮抗疲勞作用和可能的代謝機(jī)制，可以較好反映一般運(yùn)動(dòng)過(guò)程機(jī)體能量代謝的特點(diǎn)，對(duì)于普通大眾人群疲勞的