家蠶在菊酯類農(nóng)藥誘導(dǎo)后的脂肪體蛋白表達(dá)譜研究.pdf

1、家蠶不僅是重要的經(jīng)濟(jì)昆蟲，還是鱗翅目重要的模式昆蟲。糧食作物和森林害蟲絕大多數(shù)屬于鱗翅目，通過對家蠶生理、病理，遺傳等的研究，可從根本上消除蟲害的威脅，在糧食作物和森林害蟲防治上取得新突破。昆蟲的脂肪體是其體內(nèi)的一種重要組織，它既是糖、脂和蛋白質(zhì)代謝的中心，又是主要激素作用的靶組織，還具有貯存排泄和解毒等生理功能。
　　 目前的鱗翅目害蟲抗藥性基因方面研究的日益深入，國內(nèi)開展了對家蠶各組織蛋白質(zhì)組水平上的相關(guān)研究，但是從蛋白質(zhì)水

2、平上研究家蠶對農(nóng)藥的抗性機(jī)制還未見相關(guān)報(bào)道。本文研究了家蠶在菊酯類農(nóng)藥誘導(dǎo)前后脂肪體蛋白質(zhì)的表達(dá)譜特征，獲得家蠶對氯氰菊酯抗性相關(guān)蛋白，采用質(zhì)譜分析技術(shù)，鑒定了差異蛋白。在此基礎(chǔ)上采用了半定量RT-PCR方法，研究特征蛋白的基因轉(zhuǎn)錄水平特征，獲得的研究結(jié)果如下：
　　 1家蠶雌雄個體對氯氰菊酯的致死中量測定
　　 用不同濃度的氯氰菊酯農(nóng)藥點(diǎn)滴家蠶的雌雄個體，測定了不同性別的家蠶致死中量(LD50)。結(jié)果表明，雄蠶的LD5

3、0為56.336ng、雌性的LD50為49.557ng，雄性家蠶個體的抗藥性略高于雌性家蠶，為家蠶雌雄個體對農(nóng)藥的抗性研究打下基礎(chǔ)。
　　 2雄性家蠶在菊酯農(nóng)藥誘導(dǎo)后脂肪體蛋白的表達(dá)譜研究
　　 2.1雄性家蠶在菊酯農(nóng)藥誘導(dǎo)后脂肪體雙向電泳圖譜建立
　　 用蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)對菊酯類農(nóng)藥誘導(dǎo)后的雄性家蠶脂肪體蛋白質(zhì)組分的比較分析。結(jié)果表明，對照組共檢測到432個蛋白點(diǎn)，誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組檢測到369個蛋白點(diǎn)，其中能匹配的

4、蛋白點(diǎn)有342對，匹配率為76.68％，蛋白點(diǎn)主要分布在分子質(zhì)量20.1-66kD、等電點(diǎn)4-8之間。
　　 2.2雄性家蠶在菊酯農(nóng)藥誘導(dǎo)后脂肪體差異蛋白質(zhì)譜鑒定
　　 將分析出的差異蛋白進(jìn)行了基質(zhì)輔助質(zhì)量飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)分析，已鑒定的蛋白分別為家蠶伴侶素、線粒體醛脫氫酶、烯醇酶、肌動蛋白、gag-like蛋白。這些蛋白分別涉及不同的代謝途徑，如蛋白質(zhì)折疊、呼吸鏈反應(yīng)、糖酵解途徑、微管組裝等。

5、r>　　 2.3氯氰菊酯誘導(dǎo)家蠶5齡幼蟲烯醇酶基因的轉(zhuǎn)錄活性
　　 采用半定量RT-PCR方法，檢測氯氰菊酯誘導(dǎo)家蠶5齡幼蟲中腸等7種組織器官中烯醇酶基因mRNA的轉(zhuǎn)錄水平。經(jīng)氯氰菊酯誘導(dǎo)后在腦、中腸、絲腺、脂肪體、精巢、馬氏管、血液等組織器官，烯醇酶基因mRNA表達(dá)量比對照分別下調(diào)了13.79%、10.71%、22.48%、7.40%、27.00%、11.50%、14.52%，其中脂肪體的烯醇酶基因表達(dá)和蛋白的表達(dá)下調(diào)一致。

6、
　　 3雌性家蠶在菊酯農(nóng)藥誘導(dǎo)后脂肪體蛋白的表達(dá)譜研究
　　 3.1雌性家蠶在菊酯農(nóng)藥誘導(dǎo)后脂肪體雙向電泳圖譜建立
　　 用蛋白質(zhì)雙向電泳技術(shù)對菊酯類農(nóng)藥誘導(dǎo)后的雌性家蠶脂肪體蛋白質(zhì)組分的比較分析。結(jié)果表明，對照組共檢測到758個蛋白點(diǎn)，誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)組檢測到675個蛋白點(diǎn)，其中能匹配的蛋白點(diǎn)有554對，匹配率為72.84%，蛋白點(diǎn)主要分布在分子質(zhì)量20.1-66kD、等電點(diǎn)4-8之間。
　　 3.2雌性家蠶

7、在菊酯農(nóng)藥誘導(dǎo)后脂肪體差異蛋白質(zhì)譜鑒定
　　 將分析出的差異蛋白進(jìn)行了基質(zhì)輔助質(zhì)量飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOF MS)分析，已鑒定的蛋白分別為家過氧化氫酶、肌動蛋白、細(xì)胞色素p450蛋白、未知蛋白反轉(zhuǎn)錄轉(zhuǎn)座子熱點(diǎn)蛋白等。這些蛋白分別涉及不同的代謝途徑，可能與家蠶的抗性相關(guān)。
　　 本研究分析了不同性別家蠶經(jīng)菊酯類農(nóng)藥誘導(dǎo)后的表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)了相關(guān)的差異蛋白，經(jīng)質(zhì)譜鑒定后差異蛋白包括醛脫氫酶，烯醇酶，過氧化氫酶，細(xì)胞色素p