β3腎上腺素能受體通過降低鈣敏感性介導(dǎo)大鼠心臟的負(fù)性肌力作用.pdf

1、目的：
　　1、結(jié)扎大鼠心臟冠狀動脈前降支，造成心肌梗死，繼而發(fā)生缺血性心力衰竭。
　　2、在用普萘洛爾（Propranolol）阻斷β1和β2受體的前提下，通過研究β3受體激動劑BRL37344（BRL）和拮抗劑SR59230A（SR）對正常大鼠和心衰心臟功能的影響，觀察β3受體在心臟中所起的作用；
　　3、急性分離心衰大鼠心肌細(xì)胞，給予β3受體激動劑BRL37344（BRL）和拮抗劑SR59230A（SR）通過測定

2、單個(gè)心肌細(xì)胞收縮力和鈣瞬變，分析鈣敏感性對心肌細(xì)胞的影響，探討β3受體在正常和心衰大鼠心臟中的作用和影響。再進(jìn)一步給予一氧化氮合酶（NOS）阻斷劑L-NAME，分析β3受體在心力衰竭中可能的信號通路。
　　方法：
　　1、100只雄性SD（Sprigue Dawley）大鼠（體重180-220g），隨機(jī)分成假手術(shù)組（ n=30）和心臟衰竭組（ n=70）。手術(shù)前給大鼠腹腔注射10％的水合氯醛（0.3 ml/100g）麻醉，待

3、其麻醉后打開胸腔，結(jié)扎冠狀動脈。術(shù)前記錄正常心電圖，術(shù)中持續(xù)心電圖監(jiān)測。手術(shù)完成后連續(xù)3天腹腔注射20萬單位的青霉素，預(yù)防傷口感染。假手術(shù)組用同樣的方法打開胸腔但冠脈不予結(jié)扎，其余的操作同手術(shù)組。四周后假手術(shù)組和心衰組再隨機(jī)分成BRL37344組和SR59230A組。
　　2、將離體心臟連接 Langendorff灌流裝置，用1.8mM的有鈣臺式液（Tyrode’s Solution）以95%O2和5%O2充分飽和，灌注壓60mm

4、Hg，溫度39℃，pH7.38。實(shí)驗(yàn)過程中給予相關(guān)藥物，測量分析左室收縮壓（LVSP）、左室舒張壓（LVEDP）、左室等容收縮期室內(nèi)壓最大上升速率（+dp/dtmax）和左室等容舒張期室內(nèi)壓最大下降速率（-dp/dtmax），用LabChart分析軟件分析相應(yīng)數(shù)據(jù)。
　　3、分別剪取假手術(shù)組和手術(shù)組大鼠左心室前壁結(jié)扎區(qū)域邊緣部分和周圍部分，迅速將組織放入福爾馬林溶液中。石蠟包埋，切片厚度5um，再經(jīng)過脫蠟、抗原修復(fù)、加兔抗鼠ant

5、i-β3受體一抗、二抗試劑盒、加SABC封閉以及DAB顯色劑顯色后觀察β3受體的表達(dá)。
　　4、急性分離新鮮的單個(gè)心肌細(xì)胞，避光條件下負(fù)載熒光染料fura-2 AM，用有鈣臺式液（1.5mmol/L）灌流。然后用IonOptix離子影像系統(tǒng)同步測量單個(gè)心肌細(xì)胞收縮力和鈣瞬變。細(xì)胞收縮力可用bl%peak h（肌小結(jié)相對縮短幅度）、dep v（最大收縮速率）、ret v（肌小結(jié)最大舒張速率）表示；鈣瞬變以ΔCa（F340/380熒光

6、信號比值的變化幅度）、+d[Ca]/dtmax(收縮期鈣最大上升速度)、-d[Ca]/dtmax（舒張期鈣最大下降速度）表示；鈣敏感性用CaS（鈣瞬變幅度和收縮幅度的比值）表示。
　　結(jié)果：
　　1、與假手術(shù)組相比：四周、八周、十二周后心衰組大鼠心質(zhì)量指數(shù)（HW/BW）和左心質(zhì)量指數(shù)（LVW/BW）均有明顯升高（P<0.05），左室舒張末期內(nèi)徑（LVEDD）和左室收縮末期內(nèi)徑（LVESD）均明顯增大（P<0.05），左室射血

7、分?jǐn)?shù)（LVEF）和短軸縮短率（LVFS）均明顯減小（P<0.05）。
　　2、H&E染色可觀察到假手術(shù)組大鼠左心室前壁心肌細(xì)胞基本排列緊密，未見心肌損傷現(xiàn)象。手術(shù)組左心室前壁結(jié)扎處有一部分心肌細(xì)胞壞死，細(xì)胞間隙擴(kuò)張，細(xì)胞有輕到中度肥大，有膠原纖維增生變粗,且有血管增生現(xiàn)象。
　　3、免疫組織化學(xué)法檢測，鏡下可看到手術(shù)組大鼠左心室前壁心肌組織中靠近細(xì)胞膜表面附近有較多量的β3受體的表達(dá)，有些細(xì)胞的胞漿中也可見到其表達(dá)。

8、　　4、假手術(shù) BRL組和心衰BRL組的心率（HR）、左心室收縮壓（LVSP）、左室等容收縮期室內(nèi)壓最大上升速率（+dp/dtmax）及左室等容舒張期室內(nèi)壓最大下降速率（-dp/dtmax）的絕對值均有明顯降低（P<0.05），左心室舒張壓（LVEDP）明顯升高（P<0.05）；假手術(shù)SR組和心衰SR組均無明顯變化。
　　5、急性分離的單個(gè)心衰大鼠的心肌細(xì)胞，激動β3受體后肌小節(jié)收縮幅度（bl%peak h）、鈣瞬變（F340/3

9、80）幅度均明顯下降（P<0.05），鈣敏感性降低（P<0.05）。
　　6、急性分離的單個(gè)心衰大鼠心肌細(xì)胞，給予NOS的阻斷劑L-NAME后，心肌肌小節(jié)收縮幅度（bl%peak h）、鈣瞬變（F340/380）幅度均不再下降，鈣敏感性增強(qiáng)（P<0.05），說明NOS信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑和β3受體有關(guān)。
　　結(jié)論：
　　心衰大鼠心臟β3受體表達(dá)顯著增加。阻斷β1和β2腎上腺素能受體，給予BRL37344后大鼠的心臟功能受到抑制