低氧誘導(dǎo)的HMGB1在肺動脈血管平滑肌和內(nèi)皮細(xì)胞中的作用研究.pdf

1、目的：本課題通過低氧條件下（1％氧氣）人肺動脈平滑肌細(xì)胞(HPASMCs)和人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞(HPAECs)誘導(dǎo)培養(yǎng)并檢測HMGB1，TLR2、TLR4、TLR9、RAGE等主要受體及炎癥因子的表達(dá)，研究低氧對人肺動脈平滑肌細(xì)胞和人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)HMGB1和炎癥因子表達(dá)的影響；同時利用MTS法和劃痕實(shí)驗(yàn)檢測HMGB1對細(xì)胞增殖遷移活性的影響，闡明低氧誘導(dǎo)的HMGB1在血管細(xì)胞增殖、遷移及血管重塑等低氧性肺動脈高壓形成的關(guān)鍵環(huán)節(jié)中起著非

2、常重要的作用，為低氧性肺動脈高壓形成及治療提供理論依據(jù)。
　　方法：低氧培養(yǎng)人肺動脈平滑肌細(xì)胞和人肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞，RealTime-PCR檢測HMGB1,TLR2、TLR4、TLR9、RAGE等主要受體和炎癥因子的表達(dá)。MTS法觀察HMGB1對HPASMC和HPAEC增殖的影響；劃痕法觀察HMGB1對HPAEC遷移的影響；
　　結(jié)果：RealTime-PCR結(jié)果顯示，在低氧狀態(tài)下HPASMC、HPAEC中HMGB1表達(dá)量與正

3、常對照組比較都有升高，在HPASMC中升高尤其明顯；HPASMC中RAGE高表達(dá)，其他受體表達(dá)低；低氧刺激后，HPASMC中RAGE表達(dá)提高8倍左右，表明HPASMC中低氧引起的HMGB1主要受體為RAGE；在HPAEC中，RAGE、TLR2、CD24受體表達(dá)較高，其中CD24的表達(dá)最高；HPAEC中RAGE、CD24表達(dá)提高，TLR2表達(dá)降低，表明HPAEC中低氧引起的HMGB1可能的主要受體為RAGE、CD24。同時，低氧促進(jìn)HPA

4、SMC內(nèi)IL-6的表達(dá)，不影響兩種細(xì)胞TNF-a、CXCL8的表達(dá)。MTS結(jié)果顯示HMGB1劑量依賴地抑制HPAEC的增殖，對HPASMC增殖無影響。劃痕實(shí)驗(yàn)示HMGB1對HPASMC和HPAEC遷移無明顯影響。
　　結(jié)論：與意義：低氧可以促進(jìn)HPASMC和HPAEC內(nèi)HMGB1的表達(dá)提高，并HPASMC內(nèi)促炎因子IL-6表達(dá)提高；HPASMC中低氧誘導(dǎo)的HMGB1對HPASMC增殖、遷移沒有影響，表明低氧誘導(dǎo)的HMGB1不直接參

5、與血管重塑；HMGB1對HPASMC的作用受體是RAGE。HPAEC中低氧誘導(dǎo)的HMGB1劑量依賴地抑制HPAEC增殖，但對遷移沒有影響，表明HMGB1可引起內(nèi)皮功能障礙，其作用受體可能是RAGE、CD24。故低氧引起的HMGB1參與肺動脈高壓形成和發(fā)展的機(jī)制之一可能是：低氧誘導(dǎo)HPAEC、HPASMC產(chǎn)生HMGB1；HMGB1通過抑制HPAEC增殖或促凋亡引起內(nèi)皮屏障功能障礙；而低氧進(jìn)一步刺激HPASMC產(chǎn)生炎癥因子，由于內(nèi)皮屏障功能