核苷類抗生素Capuramycin與Albomycin結(jié)構(gòu)的優(yōu)化.pdf

1、目的：1、對己內(nèi)酰胺環(huán)進行替換和改造，獲得Capuramycin同系物，以期產(chǎn)生具更高成藥價值的前體化合物；闡明負責(zé)內(nèi)酰胺環(huán)連接的酶的催化機制，為未來以組合生物合成的方式構(gòu)建“非天然Capuramycin同系物庫”提供有益信息。2、獲得的Albomycin生物合成信息，為此類化合物生物合成模式的建立提供依據(jù)；研究負責(zé)鐵色素生物合成及耦合的酶，闡明其作用機制，為應(yīng)用基因工程、組合生物合成、以及半合成等策略建立一個“高鐵霉素”同系物庫提供依

2、據(jù)。
　　方法：1、目的基因的滅活與互補，微生物發(fā)酵，A-503083F的分離純化，原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，蛋白的異源表達及分離純化，體外酶催化，HPLC檢測酶活。2、微生物發(fā)酵，目的基因的滅活與互補，Albomycin鐵色素的分離純化及鑒定，原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，鐵色素的異源表達及分離純化，HPLC檢測。
　　結(jié)果：1、運用基因敲除及組合生物學(xué)的技術(shù)手段成功獲得Capuramycin A-503083F的生產(chǎn)菌株；依據(jù)Capuramycin

3、的化學(xué)結(jié)構(gòu)，采用底物添加等手段優(yōu)化發(fā)酵條件，并采用SP-207、HW-40F及HPLC聯(lián)用分離純化獲得了503083F純品；對目的基因進行異源表達，并將目的產(chǎn)物進行體外酶催化，對催化反應(yīng)進行HPLC分析，已確證反應(yīng)發(fā)生。2、依據(jù)Albomycin生物合成信息，分離純化獲得了Albomycin的鐵色素部分，為組合生物合成Albomycin鐵色素作標(biāo)準(zhǔn)品對照。運用基因敲除及組合生物學(xué)的技術(shù)手段，對鐵色素生物合成基因簇進行異源表達，采用底物添

4、加及調(diào)PH值等手段優(yōu)化了工程菌株發(fā)酵條件，為構(gòu)建鐵色素生物合成體系奠定基礎(chǔ)。
　　結(jié)論：1、在發(fā)酵過程中采取底物添加及調(diào)PH值等手段可優(yōu)化菌株發(fā)酵條件。2、采用宿主S.lividans TK-64可進行CapW和Albomycin鐵色素的異源表達。3、本研究初步闡明負責(zé)內(nèi)酰胺環(huán)連接的酶的催化機制，并通過體外酶催化反應(yīng)獲得Capuramycin同系物，證明了體外構(gòu)建“非天然Capuramycin同系物庫”的可能性。4、初步獲得的Al