COX-2及5-LOX在人肝臟星狀細胞中的表達及功能研究.pdf

1、背景:環(huán)氧合酶-2(cyclooxygease-2,COX-2)及5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)是花生四烯酸(ArachidonicAcid,AA)代謝途徑中的兩個重要的關(guān)鍵酶,參與組織的炎癥,損傷修復(fù)和纖維化過程。本實驗旨在探討COX-2及5-LOX兩種酶在人肝星狀細胞中的表達及功能。
　　 方法:原代分離培養(yǎng)人肝臟星狀細胞(humanhepaticstellatecells,hu-HSCs),傳至第

2、5代進行研究,分為加或不加1μg/ml內(nèi)毒素(lypopolysccharide,LPS)誘導(dǎo)兩大組,每組分別用NS398(高選擇性COX-2抑制劑)、AA-861(5-LOX抑制劑)和O5636(COX及LOX的聯(lián)合抑制劑)進行藥物干預(yù),設(shè)立空白對照,采用MTT法檢測細胞增殖力;ELISA檢測細胞培養(yǎng)上清液中的COX-2的代謝產(chǎn)物PGE2、TXB2及5-LOX的代謝產(chǎn)物L(fēng)TB4含量;real-timequantitativePCR(q

3、PCR)檢測COX-2、5-LOX、MCP-1和IL-6的mRNA表達水平;WesternBlot法檢測COX.2、5-LOX、Ⅰ型前膠原(Col-Ⅰ)、α-SMA、CTGF、BCl-2、BAX、磷酸化/非磷酸化AKT以及磷酸化/非磷酸化ERK的蛋白表達水平。實驗結(jié)果用SPSS軟件作方差分析(多樣本均數(shù)的兩兩比較)。
　　 結(jié)果:qPCR及WesternBlot證實COX-2及5-LOX在傳代的原代hu-HSCs中均可以經(jīng)LPS

4、誘導(dǎo)表達。與空白對照組相比,NS398、AA-861和O5636呈劑量依賴性抑制hu-HSCs細胞增殖,伴隨磷酸化AKT、磷酸化ERK及BCl-2蛋白水平的下降;同時可下調(diào)LPS誘導(dǎo)組細胞的MCP-1和IL-6的mRNA表達水平。NS398/AA-861可導(dǎo)致COX-2/5-LOX相應(yīng)的下游代謝產(chǎn)物水平減少。
　　 結(jié)論:COX-2及5-LOX在hu-HSCs中均有表達,并可經(jīng)LPS誘導(dǎo)表達增加,二者影響hu-HSCs增殖活化、