清熱解毒法聯合allo-HSCT治療重型再生障礙性貧血的研究.pdf

1、目的:
　　初步總結應用清熱解毒法聯合異基因造血干細胞移植(allo-HSCT)治療重型再生障礙性貧血（SAA）的臨床療效;觀察安腦片聯合異體骨髓細胞輸注對SAA大鼠模型的干預效果，及其對CD90.1+細胞凋亡率和PML凋亡蛋白表達的影響，探討安腦片干預SAA大鼠的分子機制，為臨床應用清熱解毒法聯合allo-HSCT治療SAA提供理論依據。
　　方法:
　　1.回顧性分析2013年10月至2015年12月廣東省中醫(yī)院血

2、液科應用清熱解毒法聯合異基因造血干細胞移植治療的8例重型再生障礙性貧血患者臨床資料，觀察移植后患者造血重建、植入情況及移植相關并發(fā)癥。隨訪時間截至2015年12月，統計患者總生存率，評價臨床療效。
　　2.選用SPF級Wistar雌性大鼠作為受鼠，接受直線加速器全身照射，建立重型再生障礙性貧血大鼠模型;SPF級SD雄性大鼠作為供鼠，用于制備異體骨髓細胞;照射后4小時內，從Wistar大鼠尾靜脈輸注SD大鼠骨髓細胞，并于輸注后第1天

3、開始給予安腦片藥液灌胃，用至第30天。
　　3.每日記錄各組大鼠一般情況:包括毛發(fā)、體重、活動度、飲食量、飲水量、大小便、出血情況、貧血情況等;實驗第7、14、30天，采用眼眶靜脈取血法留取各組大鼠標本約1ml，用于血常規(guī)、網織紅細胞百分比及絕對值檢驗;實驗第7天取重再組大鼠雙側股骨，第31天取安腦組和對照組大鼠雙側股骨，分別用于骨髓細胞形態(tài)學及組織病理學觀察。
　　4.留取各組Wistar大鼠血清標本保存?zhèn)溆?免疫磁珠法分

4、離正常SD大鼠骨髓CD90.1+細胞作為實驗研究靶細胞，于液體培養(yǎng)體系中擴增14天，然后與上述各組Wistar大鼠血清共培養(yǎng)24h后，用AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測各組CD90.1+細胞凋亡率，用間接免疫熒光標記法測定其PML蛋白表達情況。
　　結果:
　　1.8例重型再生障礙性貧血患者均獲得造血重建，中性粒細胞植活中位時間為+13.5天，血小板植活中位時間為+14天;移植后+30天時復查所有患者骨髓提示骨髓增

5、生明顯活躍或活躍，STR-PCR顯示均為完全供者嵌合體，植入率100％;供受體性別不同者經性染色體檢查均為100％供者型，移植前供受體血型不合者分別在移植后+37天、+49天、+31天和+60天轉變?yōu)楣┱哐汀?br>　　2.4例患者發(fā)生aGVHD，發(fā)生率50％，4例患者發(fā)生cGVHD，發(fā)生率50％;7例患者發(fā)生感染，發(fā)生率87.5％;3例患者出現出血性膀胱炎，發(fā)生率37.5％;所有患者均未發(fā)生肝靜脈閉塞病。截至2015年12月31日，

6、8例移植患者中死亡2例，1例患者放棄治療，5例患者獲得生存，且均達到基本治愈水平，存活率62.5％，治愈率62.5％。
　　3.各組大鼠生存曲線整體比較差異具有統計學意義(X2=65.555，P=0.000);組間比較，安腦組較鹽水組與重再組生存時間明顯延長，差異顯著（X2=42.805，P=0.000）;安腦組與對照組比較，差異無統計學意義(X2=3.353，P=0.067)。
　　4.實驗第7天各組大鼠血常規(guī)、網織紅細胞

7、百分比及絕對值結果顯示，重再組與對照組相比，差異具有統計學意義(P＜0.05)。輸注骨髓組（安腦組和鹽水組）也較對照組低下，差異顯著(P＜0.05)，但與重再組比較，差異無統計學意義(P＞0.05);第14天時上述檢測結果提示:輸注骨髓組（安腦組和鹽水組）較第7天時有所上升，其中尤以安腦組恢復更為明顯，與鹽水組相比，差異具有統計學意義(P＜0.05)，但較對照組仍然低下(P＜0.05);第30天安腦組與對照組相比，差異無統計學意義（P＞

8、0.05）。
　　5.與對照組相比，重再組大鼠骨髓組織明顯脂肪化，增生極度低下，造血細胞極度減低，非造血細胞增多，骨髓造血組織支架結構稀疏，網狀纖維和毛細血管網明顯減少，骨髓間質水腫并出血。安腦組大鼠骨髓改變較重再組明顯改善。
　　6.各組之間CD90.1+細胞凋亡率有顯著差異(P＜0.05);組間兩兩比較提示:對照組均明顯低于重再組和安腦組（P均＜0.05），同時安腦組也低于重再組（P＜0.05）;加入重再組血清后，CD9

9、0.1+細胞胞內PML蛋白表達有所增加，而安腦組PML蛋白表達未見明顯增加。
　　結論:
　　1.清熱解毒法可能在促進重型再障移植患者造血重建及供者細胞植入方面具有良好的作用，臨床上應根據移植患者所表現的不同中醫(yī)證候進行早期干預，有望改善或減緩移植患者的并發(fā)癥。
　　2.安腦片對全身照射誘導的重再大鼠模型具有良好的保護作用，能促進大鼠骨髓紅系細胞的增殖、分化及成熟，增強異體骨髓細胞輸注的治療效果，利于異體骨髓細胞的植入