CYLD對(duì)Noscapine敏感性及Aurora-B活性的調(diào)節(jié).pdf

1、CYLD（cylindromatosis）基因位于16號(hào)染色體長臂12.1區(qū)，編碼一個(gè)長度為956個(gè)氨基酸殘基的蛋白質(zhì)，這種蛋白的缺陷或缺失會(huì)導(dǎo)致頭部或面部皮膚附屬器的良性腫瘤，如多發(fā)性家族性毛發(fā)上皮瘤(MFT)，家族性圓柱瘤(FC)和Brooke-Spiegler綜合癥(BSS)等。CYLD含有三個(gè)微管相關(guān)蛋白甘氨酸富集(CAP-Gly)結(jié)構(gòu)域，均位于其N端，其C端含有一個(gè)泛素水解酶催化結(jié)構(gòu)域(ubiquitin-specific p

2、rotease doman，USP結(jié)構(gòu)域)，因此賦予該蛋白去泛素酶的功能，能特異性去除靶蛋白上通過第63位賴氨酸連接形成的多聚泛素鏈。大量證據(jù)表明，CYLD通過對(duì)NEMO、Trat2、Traf6、RIP1等蛋白的去泛素化作用，負(fù)向調(diào)控NF-kB和JNK信號(hào)通路的活性。CYLD去泛素化酶活性的缺失將導(dǎo)致NF-kB和JNK通路的過渡激活，刺激細(xì)胞異常增殖。因此，普遍認(rèn)為CYLD是一種腫瘤抑制因子。
　　 除了具有去泛素酶活性之外，實(shí)

3、驗(yàn)室的前期工作證明CYLD還是一個(gè)微管結(jié)合蛋白。CYLD在細(xì)胞內(nèi)及體外實(shí)驗(yàn)中均能夠與微管相互作用，這種相互作用主要是由CYLD的第一個(gè)CAP-Gly結(jié)構(gòu)域介導(dǎo)的；CYLD能夠降低微管蛋白體外聚合成微管的臨界濃度，促進(jìn)微管的組裝和穩(wěn)定性?？紤]到微管在細(xì)胞內(nèi)的多種重要作用以及微管作為腫瘤化療的靶點(diǎn)，推斷CYLD與微管的結(jié)合可能具有重要的生理意義，有可能會(huì)影響以微管為靶點(diǎn)的抗腫瘤藥物的敏感性。
　　 Noscapme是一種以為微管為靶

4、點(diǎn)的抗腫瘤藥物。本研究發(fā)現(xiàn)在一系列白血病細(xì)胞系中，CYLD蛋白的表達(dá)水平與Noscapine的藥物敏感性呈現(xiàn)相關(guān)性。在多種白血病細(xì)胞系和原代白血病細(xì)胞中，CYLD促進(jìn)Noscapine所導(dǎo)致有絲分裂阻遏和細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，且CYLD對(duì)Noscapine敏感性的影響與其去泛素化酶活性無關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，CYLD結(jié)合在微管的外表面，這種結(jié)合促進(jìn)了Noscapme與微管的相互作用，從而增加了藥物的敏感性。這些結(jié)果表明，CYLD可以促進(jìn)白血病細(xì)胞

5、對(duì)Noscapine的藥物敏感性，從而為個(gè)體化治療提供理論依據(jù)。
　　 雖然CYLD最初是作為一個(gè)腫瘤抑制因子被發(fā)現(xiàn)的，但最近發(fā)現(xiàn)其在多種重要的生理活動(dòng)中起作用，如免疫應(yīng)答、細(xì)胞遷移、血管新生、細(xì)胞周期調(diào)控等。在細(xì)胞有絲分裂的過程中，CYLD起到了重要的調(diào)節(jié)作用，已證實(shí)降低CYLD的表達(dá)會(huì)延遲細(xì)胞進(jìn)入分裂期。在實(shí)驗(yàn)中，我們發(fā)現(xiàn)CYLD的過表達(dá)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞的多核化現(xiàn)象，推測(cè)CYLD對(duì)胞質(zhì)分裂的過程也起到了重要作用，但其詳細(xì)的分子機(jī)制

6、尚無報(bào)道。
　　 Aurora2B是Aurora激酶家族中的一員，在細(xì)胞分裂，尤其是胞質(zhì)分裂過程中起到重要的調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在細(xì)胞內(nèi)或在體外，CYLD和有絲分裂激酶Aurora-B都存在相互作用，這種相互作用是由CYLD的第三個(gè)CAP-GIy結(jié)構(gòu)域所介導(dǎo)的。體外激酶實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，這種相互作用會(huì)抑制Aurora-B的激酶活性。進(jìn)一步的機(jī)制研究結(jié)果表明，CYLD對(duì)Aurora-B激酶活性的抑制不依賴于其去泛素化酶活性，而是

7、通過蛋白磷酸酶PP2A發(fā)生作用。CYLD與PP2A存在直接相互作用，并且促進(jìn)PP2A與Aurora-B的結(jié)合，使Aurora-B的第232位絲氨酸去磷酸化，從而抑制Aurora-B的激酶活性。如果CYLD蛋白C端缺失突變，破壞了CYLD與PP2A的相互作用，則不能促進(jìn)PP2A與Aurora-B的結(jié)合，對(duì)Aurora-B的激酶活性的抑制作用也隨之消失。通過砑究，發(fā)現(xiàn)了CYLD的兩個(gè)新的結(jié)合蛋白——Aurora-B和PP2A，并發(fā)現(xiàn)CYLD