肺炎老齡大鼠心肌損傷的JAK-STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常與毒素清顆粒的作用.pdf

1、目的：從心肌組織細(xì)胞因子及JAK/STAT通路相關(guān)蛋白、基因表達(dá)方面，揭示肺炎克雷伯桿菌肺炎老齡大鼠心肌損傷的特點(diǎn)及其分子生物學(xué)機(jī)制，評(píng)價(jià)中藥復(fù)方毒素清顆粒對(duì)心肌損傷的保護(hù)作用，并進(jìn)一步提示毒素清顆粒心肌損傷保護(hù)的分子生物學(xué)機(jī)制，為其臨床應(yīng)用提供依據(jù)。 方法：采用氣管插管法復(fù)制肺炎模型，制備大鼠肺炎克雷伯桿菌肺炎心肌損傷模型。 1實(shí)驗(yàn)一雄性SD大鼠，5-6月齡大鼠，隨機(jī)分為青年對(duì)照組和青年模型組；老齡大鼠30只，隨機(jī)分為

2、老齡對(duì)照組、老齡模型組。造模后48h取材。觀察造模前0.5h，造模后24h、48h外周WBC計(jì)數(shù)和中性粒細(xì)胞比率，動(dòng)脈血LDH、CK、CK-MB和血?dú)夥治觯挥^察肺、心組織普通病理改變和心肌組織的超微結(jié)構(gòu)；肺泡灌洗液做細(xì)菌培養(yǎng)作菌屬鑒定。 2實(shí)驗(yàn)二老齡雄性SD大鼠，隨機(jī)分為洛美沙星組、毒素清組、RPM組、RPM+毒素清組、AG490組和AG490+毒素清組。造模前3天至取材前1天灌胃毒素清(毒素清組、AG490+毒素清組、RPM+

3、毒素清組)、RPM(RPM組、RPM+毒素清組)和洛美沙星(洛美沙星組)；造模前0.5h皮下注射AG490(AG490組、AG490+毒素清組)一次。按照動(dòng)物體型系數(shù)換算等效劑量：毒素清、AG490、RPM、洛美沙星劑量分別為5.7g·kg-1·d-1、8mg·kg-1、0.4mg·kg-1·d-1、40mg·kg-1·d-1。取材與處理同實(shí)驗(yàn)1。 結(jié)果：模型組及各藥物治療組大鼠支氣管肺泡灌洗液細(xì)菌培養(yǎng)后，菌屬鑒定均檢出肺炎克雷

4、伯桿菌。 1實(shí)驗(yàn)一肺炎克雷伯桿菌肺炎大鼠心肌損傷模型的建立及增齡因素的影響1.1各組大鼠外周WBC計(jì)數(shù)和中性粒細(xì)胞比率的變化青年模型組和老齡模型組24h和48h的WBC計(jì)數(shù)和中性粒細(xì)胞比率均分別較青年對(duì)照組和老齡對(duì)照組明顯升高(P<0.01)。老齡模型組WBC計(jì)數(shù)和中性粒細(xì)胞比率在24h和48h升高程度均較青年模型組為低(P>0.05)。 1.2各組大鼠肺臟、心肌病理損傷和心肌酶學(xué)的變化青年模型組和老齡模型組肺臟和心肌組

5、織病理損傷以及心肌超微結(jié)構(gòu)改變明顯，肺臟、心肌含水量均有明顯升高(P<0.05，P<0.01)；LDH、CK和CK-MB均有明顯升高(P<0.01，P<0.05)。老齡模型組LDH、CK、CK-MB及心肌含水量較青年模型組顯著升高(P<0.05)。 1.3各組大鼠動(dòng)脈血PaO2和PaCO2的變化模型組和老齡模型組PaO2明顯降低(P<0.01)，PaCO2明顯升高(P<0.05)；老齡模型組PaCO2較青年模型組明顯升高(P<0

6、.05)，PaO2明顯降低(P<0.05)。 2實(shí)驗(yàn)二毒素清顆粒肺炎克雷伯桿菌肺炎老齡大鼠心肌損傷的保護(hù)作用及其對(duì)JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的影響2.1各組大鼠外周血 WBC計(jì)數(shù)和中性粒細(xì)胞比率的變化老齡模型組24h、48h WBC計(jì)數(shù)和中性粒細(xì)胞比率均較老齡對(duì)照組顯著升高(P<0.01)。藥物干預(yù)后，各組24h、48h WBC計(jì)數(shù)和中性粒細(xì)胞比率均顯著降低(P<0.05，P<0.01)，以RPM+毒素清組和AG490+毒素清組降

7、低最為顯著(P>0.05)。 2.2各組大鼠肺臟、心肌病理損傷和心肌酶學(xué)的變化各藥物治療后大鼠肺臟、心肌組織病理損傷減輕，LDH、CK、CK-MB均明顯降低(P<0.05，P<0.01)，心肺組織含水量均不同程度降低(P<0.05，P<0.01)。 2.3各組大鼠動(dòng)脈血PaO2和PaCO2的變化藥物治療后，毒素清組PaO2明顯升高、PaCO2明顯降低(P<0.05)，洛美沙星組PaCO2明顯降低(P<0.05)。毒素清組

8、、AG490組及AG490+毒素清組PaCO2較洛美沙星組明顯降低(P<0.05，P<0.01)。 2.4各組大鼠心肌組織細(xì)胞因子表達(dá)的變化藥物治療后，各藥物組IL-6、TNF-α蛋白表達(dá)和/或陽性細(xì)胞數(shù)均顯著降低(P<0.01)，RPM組、RPM+毒素清組、AG490組及AG490+毒素清組IL-1蛋白表達(dá)和/或陽性細(xì)胞數(shù)均顯著降低(P<0.01)。RPM組、RPM+毒素清組、AG490組及AG490+毒素清組IL-1、TNF

9、-α蛋白表達(dá)和/或陽性細(xì)胞數(shù)均較洛美沙星組顯著降低(P<0.01)，RPM+毒素清組IL-6陽性細(xì)胞數(shù)均顯著降低(P<0.01)，毒素清組蛋白表達(dá)均顯著降低(P<0.01)。AG490+毒素清組IL-1陽性細(xì)胞數(shù)，RPM+毒素清組IL-6陽性細(xì)胞數(shù)，AG490+毒素清組TNF-α蛋白表達(dá)及陽性細(xì)胞數(shù)均顯著較毒素清組降低(P<0.01)。 2.5各組大鼠心肌組織JAK/STAT通路相關(guān)蛋白表達(dá)的變化各藥物組p-JAK2、p-STA

10、T1、p-STAT3、TAT5蛋白表達(dá)及陽性細(xì)胞數(shù)均較老齡模型組不同程度降低。與毒素清組比較，RPM+毒素清組、AG490+毒素清組p-JAK2、p-STAT3蛋白表達(dá)，STAT1表達(dá)及陽性細(xì)胞數(shù)顯著降低(P<0.01)，RPM組STAT1蛋白表達(dá)及陽性細(xì)胞數(shù)、p-STAT3蛋白表達(dá)顯著降低(P<0.01)，AG490組p-JAK2、p-STAT3蛋白表達(dá)、p-STAT1、p-STAT5陽性細(xì)胞數(shù)顯著降低(P<0.01，P<0.05)，

11、RPM組及RPM+毒素清組STAT5蛋白表達(dá)均顯著升高(P<0.01)。 2.6各組大鼠心肌組織JAK2mRNA和SOCS3mRNA表達(dá)的變化老齡模型組JAK2mRNA和SOCS3mRNA表達(dá)均顯著高于老齡對(duì)照組(P<0.01，P<0.05)；與老齡模型組比較，各藥物組JAK2mRNA表達(dá)水平均顯著降低(P<0.05，P<0.01)，SOCS3mRNA均有不同程度的升高，AG490+毒素清組升高明顯(P<0.01)。 結(jié)

12、論：①基于氣管插管法復(fù)制肺炎模型，成功制備了肺炎克雷伯桿菌肺炎大鼠心肌損傷模型，老齡大鼠心肌損傷程度較青年大鼠嚴(yán)重，這可能與增齡因素有關(guān)。②IL-1、IL-6、TNF-α等細(xì)胞因子紊亂及JAK/STAT信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與肺炎導(dǎo)致心肌損傷的發(fā)生和發(fā)展，抑制這些因子的表達(dá)和激活可以改善大鼠心肌損傷。③毒素清對(duì)老年肺炎心肌損傷具有明顯的保護(hù)作用，其主要機(jī)制可能與其參與下調(diào)細(xì)胞因子的表達(dá)，調(diào)控JAK/STAT信號(hào)通路激活和SOCS3mRNA的表達(dá)