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文檔簡(jiǎn)介
1、在我國(guó)北方推廣種植的歐美楊107是優(yōu)良紙漿材和生態(tài)防護(hù)林品種,是基因工程育種研究中的優(yōu)良材料。在已有的歐美楊107組織培養(yǎng)條件基礎(chǔ)上,本實(shí)驗(yàn)首先對(duì)該品種的卡那霉素敏感性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明歐美楊107外植體的再生、繼代和生根培養(yǎng)適宜的卡那霉素篩選濃度分別為30mg/L、30mg/L和20mg/L。為了提高歐美楊107的外源基因轉(zhuǎn)化效率,本試驗(yàn)使用攜帶GUS和nptⅡ基因的pBI121表達(dá)載體轉(zhuǎn)化歐美楊107,對(duì)菌種、多胺和表面活性劑等影
2、響轉(zhuǎn)化效率的因素進(jìn)行了研究。GUS瞬時(shí)表達(dá)檢測(cè)結(jié)果表明,經(jīng)5mM腐胺或亞精胺活化的農(nóng)桿菌侵染獲得的瞬時(shí)表達(dá)率提高到對(duì)照的2.4和1.8倍。表面活性劑PluronicF-68和SilwetL-77的使用同樣能提高侵染效率,其中添加0.01%(w/v)PluronicF-68獲得的效果最佳。在此基礎(chǔ)之上,實(shí)驗(yàn)中利用卡那霉素篩選對(duì)侵染后外植體的再生和繼代進(jìn)行了研究??股睾Y選條件下的外植體再生和繼代出芽趨勢(shì)與GUS瞬時(shí)表達(dá)檢測(cè)的結(jié)果一致,表明
3、無(wú)論是腐胺還是PluronicF-68處理都可以提高歐美楊107遺傳轉(zhuǎn)化效率。 甜菜堿合成涉及多個(gè)酶的作用,磷酸乙醇胺N-甲基轉(zhuǎn)移酶(PEAMT)是合成膽堿的關(guān)鍵酶,膽堿單加氧酶(CMO)則催化膽堿氧化為甜菜堿醛,最后由甜菜堿醛脫氫酶(BADH)作用氧化為甜菜堿,其中PEAMT和CMO對(duì)甜菜堿積累起著決定性作用。實(shí)驗(yàn)中首先用卡那霉素抗性基因nptⅡ替換了載體pYLTAC747H上的潮霉素基因hpt,之后將兩段Mar序列與鹽角草的
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