辛伐他汀對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子及其受體的影響.pdf

1、目的：研究辛伐他汀對(duì)哮喘大鼠氣道炎癥和氣道重塑的影響，揭示辛伐他汀對(duì)氣道炎癥、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，簡(jiǎn)稱VEGF)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(Vascular endothelial growth factorreceptor2，簡(jiǎn)稱VCGFR2)的調(diào)節(jié)作用。
　　方法：將40只健康清潔級(jí)SD大鼠(雄性，6周齡，體重130-150克)，隨機(jī)分成5組，分別為：正常對(duì)照組

2、、哮喘組、S1組(辛伐他汀灌胃20mg/Kg)、S2組(辛伐他汀灌胃40mg/Kg)、S3組(辛伐他汀灌胃60mg/Kg)。哮喘組大鼠于實(shí)驗(yàn)第1、8天腹腔注射卵清蛋白(OVA)100mg和氫氧化鋁100mg進(jìn)行致敏；第15天起將大鼠置于非完全密閉的玻璃箱內(nèi)霧化吸入OVA(OVA濃度由1％逐漸遞增，每激發(fā)4次增加一次，分別為：1％、1.5％、2％、2.5％、3％)，每次30min，隔日一次，共激發(fā)20次。S1、2、3組在霧化前30min進(jìn)

3、行辛伐他汀灌胃，余同哮喘組。正常對(duì)照組致敏和激發(fā)均使用生理鹽水，余同哮喘組。末次激發(fā)后24小時(shí)后，用1％戊巴比妥麻醉大鼠，應(yīng)用動(dòng)物肺功能儀檢測(cè)大鼠肺功能；收集肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid，簡(jiǎn)稱BALF)，分別計(jì)算細(xì)胞總數(shù)和嗜酸性粒細(xì)胞總數(shù)；部分肺組織行病理切片，蘇木精-伊紅(hematoxylin-eosin，簡(jiǎn)稱HE)染色；免疫組織化學(xué)法檢測(cè)各組大鼠肺組織中VEGF及VEGFR2的表達(dá)情況，并應(yīng)

4、用圖像分析軟件測(cè)量VEGF及VEGFR2相對(duì)表達(dá)強(qiáng)度；采用計(jì)算機(jī)圖象分析技術(shù)測(cè)定肺組織切片中的血管計(jì)數(shù)和支氣管的管壁厚度；用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，簡(jiǎn)稱ELISA)檢測(cè)血清中白介素-4(IL-4)、干擾素-γ(IFN-γ)、VEGF的水平。
　　結(jié)果：
　　1、肺功能檢測(cè)結(jié)果：
　　5組大鼠基礎(chǔ)氣道峰值相比，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。給予靜脈注射乙酰膽

5、堿后哮喘組、S1組、S2組和S3組氣道壓力峰值下降，正常對(duì)照組氣道壓力峰值無明顯變化，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2、肺泡灌洗液中細(xì)胞總數(shù)及嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)(×106/L)：
　　哮喘組(32.55±3.2，7.78±0.95)高于其他四組；S1組(22.68±2.92，4.33±0.55)、S2組(16.93±2.70，2.67±0.56)和S3組(13.20±3.66，1.83±0.51)，三組均高于正常對(duì)

6、照組(9.49±2.84，0.83±0.42)；S1組高于S2組；S2組高于S3組；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　3、病理結(jié)果：
　　哮喘組大鼠肺組織可見大量的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、黏液分泌、杯狀細(xì)胞增生、平滑肌細(xì)胞增生、血管增生、基底膜增厚、管壁厚度增加。應(yīng)用辛伐他汀干預(yù)后能明顯減輕上述的病理改變。
　　4、圖像分析支氣管管壁厚度及血管計(jì)數(shù)：
　　哮喘組(96.71±5.54，23.13±1.89)較其他四組

7、明顯增加；S1組(86.57±6.79，18.50±0.93)、S2組(78.32±2.69，16.83±0.98)、S3組(69.08±7.02，15.17±0.75)，三組均高于正常對(duì)照組(60.83±6.42，12.01±0.82)；S1組高于S2組；S2組高于S3組；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　5、VEGF和XEGFR2免疫組織化圖像的半定量分析，以陽性表達(dá)的平均光密度值為統(tǒng)計(jì)量：
　　哮喘組(0.37±

8、0.02，0.41±0.03)明顯高于其他四組；S1組(0.32±0.04，0.35±0.03)、S2組(0.27±0.05，0.30±0.03)、S3組(0.23±0.03，0.25±0.03)，三組均高于正常對(duì)照組(0.19±0.04，0.20±0.02)；S1組高于S2組；S2組高于S3組：差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　6、ELISA法檢測(cè)血清中IL-4、VEGF和IFN-γ的水平：
　　IL-4、VEGF：

9、哮喘組(475.71±55.56，48.20±5.23)明顯高于其他四組；S1組(362.91±37.59，37.25±4.20)、S2組(284.62±34.15，30.27±2.91)、S3組(225.18±26.92，22.77±3.54)均高于正常對(duì)照組(174.34±40.64、14.94±3.18)；S1組高于S2組；S2組高于S3組；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　IFN-γ：哮喘組(11.86±3.17)明

10、顯低于其他四組；S1組(22.11±4.82)、S2組(34.52±4.95)、S3組(44.70±4.16)均低于正常對(duì)照組(51.26±8.59)；S1組低于S2組；S2組低于S3組；差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。
　　7、直線相關(guān)性分析結(jié)果：
　　血管計(jì)數(shù)與支氣管管壁厚呈正相關(guān)(r=0.893，P<0.01)；血清中IL-4與IFN-γ呈負(fù)相關(guān)(r=-0.867，P<0.01)；肺組織中VEGF的表達(dá)與VEGFR2

11、、血管計(jì)數(shù)、支氣管管壁厚度、血清中IL-4的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.859，P<0.01；r=0.852，P<0.01；r=0.858，P<0.01；r=0.824，P<0.01)，與IFN-γ呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.866，P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、通過抗原致敏和反復(fù)霧化激發(fā)，成功建立了具有氣道炎癥、氣道高反應(yīng)性和氣道重塑特征的大鼠哮喘模型。
　　2、哮喘組血清中的VEGF和肺組織中的VEGF及VEGFR2

12、表達(dá)明顯升高，且肺組織中的VEGF與血管計(jì)數(shù)、支氣管管壁厚度和血清中的IL-4呈正相關(guān)，與血清中的IFN-γ呈負(fù)相關(guān)，提示VEGF對(duì)哮喘的炎癥因子具有介導(dǎo)作用，參與了哮喘氣道炎癥和氣道重塑的發(fā)展過程。
　　3、辛伐他汀通過升高IFN-γ，降低IL-4來調(diào)節(jié)Th1/Th2失衡，達(dá)到減輕氣道炎癥和氣道阻力的作用。
　　4、辛伐他汀通過影響VEGF和VEGFR2的表達(dá)水平，來抑制哮喘氣道炎癥、氣道重塑。
　　5、辛伐他汀對(duì)哮