神經(jīng)母細(xì)胞瘤組織中PHOX2B和ALK的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：神經(jīng)母細(xì)胞瘤(neuroblastoma，NB)既是15歲以內(nèi)兒童最常見(jiàn)的顱外實(shí)體腫瘤，同時(shí)又是1歲以內(nèi)小兒最常被診斷的腫瘤，診斷時(shí)的中位年齡多在18個(gè)月。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年平均降生7000個(gè)新生兒中就有1例NB患兒，其死亡率更是占到兒童腫瘤相關(guān)死亡率的10％。目前認(rèn)為NB起源于椎旁交感神經(jīng)節(jié)和軀干神經(jīng)嵴細(xì)胞來(lái)源的腎上腺髓質(zhì)。然而，對(duì)于交感神經(jīng)形成過(guò)程中神經(jīng)母細(xì)胞瘤的發(fā)生機(jī)制以及驅(qū)動(dòng)神經(jīng)母細(xì)胞瘤進(jìn)一步發(fā)展的細(xì)胞機(jī)制至今未明。多數(shù)NB發(fā)病

2、隱匿，進(jìn)展迅速，出現(xiàn)臨床癥狀時(shí)，多數(shù)患者已出現(xiàn)包括骨髓、骨、淋巴結(jié)、肝臟及皮下組織等部位的轉(zhuǎn)移。該病的組織學(xué)特征決定了它多樣的臨床轉(zhuǎn)歸：分化程度高的類型雖然已發(fā)生轉(zhuǎn)移，也有自發(fā)消退的可能；分化程度低的類型盡管應(yīng)用多種治療方法仍無(wú)法阻止腫瘤進(jìn)展。因此，臨床上對(duì)于高危因素的識(shí)別格外重要。最近有學(xué)者進(jìn)行回顧性分析后認(rèn)為血清神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)＞100μg/L、血清鐵蛋白(SF)＞150ng/L、乳酸脫氫酶(LDH)＞800U/L是除

3、了年齡、臨床分期、病理學(xué)分型、MYCN擴(kuò)增、DNA倍型以外，提示NB預(yù)后不良的指標(biāo)。盡管對(duì)該病的治療方法多樣，但高?；純旱奈迥隉o(wú)事件生存率僅40%左右，對(duì)于高危NB患兒的救治工作仍是臨床所面臨的巨大挑戰(zhàn)。
　　國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)配對(duì)同源異型盒蛋白2B(paired-like homebox2B,PHOX2B)與間變性大細(xì)胞淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase，ALK)都涉及家族性NB的發(fā)生與發(fā)展，但二者在散

4、發(fā)型NB中的關(guān)系研究甚少。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)檢測(cè)PHOX2B與ALK蛋白在散發(fā)型NB組織中的表達(dá)情況，分析它們與NB患兒的性別、年齡、病理類型、臨床分期和初診的NSE、LDH、SF之間的關(guān)系，以及這兩種因子表達(dá)的相關(guān)性，以期在蛋白水平上研究?jī)烧咴谏窠?jīng)母細(xì)胞瘤的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中所扮演的角色，同時(shí)為中晚期NB患兒在靶向治療方面提供新的思路。
　　方法：本實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)組研究對(duì)象為河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院兒科自2005年1月1日至2015年10月31日十年

5、間收治的，臨床信息完整，病理學(xué)標(biāo)本充足的散發(fā)型神經(jīng)母細(xì)胞瘤患兒石蠟包埋組織切片，共40例，所有標(biāo)本均經(jīng)手術(shù)切除或穿刺活檢的獲得。按照其不同的臨床特點(diǎn)將其分為NSE＜100μg/L組和NSE＞100μg/L組、SF＜150ng/L組和SF＞150ng/L組以及LDH＜800U/L組和LDH＞800U/L組。同時(shí)按照性別、年齡、分期及病理類型進(jìn)行分組。另外選取經(jīng)手術(shù)或者穿刺活檢獲得的，后經(jīng)病理學(xué)確診的正常淋巴結(jié)15例作為對(duì)照組。所有標(biāo)本均采

6、用S-P免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)PHOX2B及ALK蛋白的表達(dá)情況。所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，并對(duì)這兩種因子的表達(dá)情況做相關(guān)性分析。
　　結(jié)果：
　　1 PHOX2B的表達(dá)
　　1.1組間比較
　　PHOX2B在所有陽(yáng)性NB組織中的表達(dá)均定位于細(xì)胞核內(nèi)。實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性率為87.5%，其中高表達(dá)31例，高表達(dá)率為77.5%。對(duì)照組無(wú)PHOX2B表達(dá)，陽(yáng)性率0%，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

7、＜0.01)。
　　1.2組內(nèi)比較
　　在Ⅰ-Ⅲ期和Ⅳ期NB患兒中，陽(yáng)性率分別為72.73%和93.10%，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.228)。高表達(dá)率分別為36.36%和93.10%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.001)。
　　在神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)母細(xì)胞瘤及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤三種不同的病理類型中，陽(yáng)性率分別為96.77%，83.33%和0%，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；進(jìn)一步行神經(jīng)母細(xì)胞瘤和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤陽(yáng)性率比較，

8、差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.001），神經(jīng)母細(xì)胞瘤及神經(jīng)節(jié)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)母細(xì)胞瘤及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤陽(yáng)性率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.017)。高表達(dá)率分別為87.10%，66.67%和0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002)；進(jìn)一步行神經(jīng)母細(xì)胞瘤和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤高表達(dá)率比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.006），神經(jīng)母細(xì)胞瘤及神經(jīng)節(jié)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)母細(xì)胞瘤及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤高表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.017)。
　　PHOX2

9、B的陽(yáng)性率和高表達(dá)率與性別、年齡、NSE、SF、LDH無(wú)關(guān)。
　　2 ALK的表達(dá)
　　2.1組間比較
　　ALK在所有陽(yáng)性 NB組織中的表達(dá)均定位于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。實(shí)驗(yàn)組陽(yáng)性率為82.5%，其中高表達(dá)25例，高表達(dá)率為62.5%。對(duì)照組無(wú)ALK表達(dá)，陽(yáng)性率0%，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。
　　2.2組內(nèi)比較
　　在男性和女性NB患兒中，陽(yáng)性率分別為73.91%和94.12%，二者差異

10、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.214)。高表達(dá)率分別為47.83%和82.35%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.026)。
　　在18個(gè)月以內(nèi)和18個(gè)月以上 NB患兒中，陽(yáng)性率分別為50%和93.33%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.008)。高表達(dá)率分別為40%和70%，二者差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.187)。
　　在Ⅰ-Ⅲ期和Ⅳ期NB患兒中，陽(yáng)性率分別為54.55%和93.10%，二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.016)。高表達(dá)率

11、分別為36.36%和72.41%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.035)。
　　ALK蛋白的陽(yáng)性率與高表達(dá)率與NB病理類型、NSE、SF、LDH無(wú)關(guān)。
　　3 Spearman相關(guān)性分析
　　PHOX2B及 ALK蛋白在 NB組織中的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.600，P＜0.001)，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1 PHOX2B在神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)母細(xì)胞瘤及神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤三種不同的病理類型中陽(yáng)性率及高表達(dá)

12、率依次遞減，故可作為判斷腫瘤細(xì)胞分化程度的指標(biāo)。
　　2 ALK蛋白在NB患兒中的陽(yáng)性率與年齡有關(guān)。隨著年齡增長(zhǎng)，ALK蛋白陽(yáng)性率增加。
　　3 ALK蛋白陽(yáng)性率及高表達(dá)率在晚期NB患兒中增加，且易于檢測(cè)，不僅可作為判斷腫瘤惡性程度的指標(biāo)，而且可作為晚期NB患兒靶向治療的靶點(diǎn)。
　　4 PHOX2B及ALK蛋白在散發(fā)型NB組織中的表達(dá)量異常升高，兩者呈正相關(guān)，即 PHOX2B表達(dá)量越高， ALK蛋白表達(dá)量越高，提示PH