利多卡因聯(lián)合亞低溫治療對大鼠SAH早期腦損傷保護作用的研究.pdf

1、目的:1、用枕大池二次注血法構(gòu)建大鼠SAH后EBI模型，探討枕大池注射利多卡因聯(lián)合亞低溫治療對大鼠SAH后早期腦損傷是否具有神經(jīng)保護作用。2、枕大池注射利多卡因聯(lián)合亞低溫治療對大鼠SAH后早期腦損傷，不同時程的療效有無差別。
　　方法:選用體重280-320g健康清潔級成年SD大鼠60只，雌、雄鼠各30只，隨機分五組（每組動物12只）：對照組、SAH組、SAH+利多卡因+亞低溫2h組、SAH+利多卡因+亞低溫4h組和SAH+利多卡

2、因+亞低溫6h組。SAH組、各SAH+利多卡因+亞低溫組采用枕大池二次注血0.3ml,各SAH+利多卡因+亞低溫組于2次注血0.3ml后再注入2％利多卡因0.02m1后立即用冰袋全身降溫治療，對照組除不給予注血和治療外，其余處理與其他各組相同。每個亞低溫治療組的大鼠體溫控制在31℃-33℃，其它兩組體溫保持在正常范圍。用激光多普勒檢測各組大鼠術(shù)前1小時、枕大池二次注血后24小時、48小時皮層局部腦血流（rCBF），同時觀察SD大鼠行為、

3、神經(jīng)功能變化，在枕大池二次注血后48小時進行神經(jīng)功能評分。然后將大鼠用10%水合氯醛再次麻醉后處死取腦，對腦組織行HE染色，取海馬組織切片對海馬神經(jīng)元形態(tài)及密度進行組織病理觀察,取腦基底動脈切片通過醫(yī)學(xué)圖像分析系統(tǒng)計算腦基底動脈血管壁厚度，觀察血管收縮情況，測量對比血管內(nèi)徑周長；給大鼠靜脈注射伊文思藍，處死動物后對其腦組織EB含量進行測定；用干濕重法測量腦組織中水分的重量；用酶聯(lián)免疫吸附法檢測大鼠腦皮層中炎性因子IL-1β、TNF-α和

4、IL-6表達情況；免疫組化法檢測腦組織中凋亡信號調(diào)節(jié)激酶Ⅰ（ASK-1）、熱休克蛋白（HSP27）的表達情況。通過以上檢測數(shù)據(jù)來探討枕大池注射利多卡因聯(lián)合亞低溫治療對SAH后EBI是否具有神經(jīng)保護作用，枕大池注射利多卡因聯(lián)合亞低溫治療對大鼠SAH后早期腦損傷，不同時程療效有無差別。
　　結(jié)果:1、病理觀察：蛛網(wǎng)膜下腔出血組切片顯示基底動脈變細，管壁增厚，炎性細胞浸潤，海馬正常神經(jīng)元損傷嚴重。對照組與SAH組相比：海馬正常神經(jīng)元密度

5、正常,未見明顯血管痙攣，無明顯血管損傷。利多卡因+亞低溫各組損傷較SAH組輕,其中以利多卡因+亞低溫6小時組損傷最輕。2、腦血流監(jiān)測結(jié)果：與注血前相比，SAH組2次注血后48h腦血流量下降58%，SAH+利多卡因+亞低溫2小時組2次注血后48h腦血流量下降60%，SAH+利多卡因+亞低溫4小時組2次注血后48h腦血流量下降44%，SAH+利多卡因+亞低溫6小時組2次注血后48h腦血流量下降42%。注血前各組腦血流差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0

6、.05），與注血前相比，各組2次注血后24h、48h腦血流水平變化有顯著差異(P<0.05)。SAH+利多卡因+亞低溫6h組與2h、4h組相比，結(jié)果具有差異，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），SAH+利多卡因+亞低溫與SAH組相比，結(jié)果具有差異（P<0.05）.3、腦水腫指數(shù)測定結(jié)果：與對照組相比，蛛網(wǎng)膜下腔出血組大鼠腦水腫指數(shù)增加明顯，48h測得的腦水腫百分數(shù)達到84.92％（P<0.05）；SAH+利多卡因+亞低溫2h組與SAH組

7、比，48h時水腫百分數(shù)達到83.01％（P<0.05）；SAH+利多卡因+亞低溫4h組與SAH組比，48h時水腫百分數(shù)達到80.96％（P<0.05）；SAH+利多卡因+亞低溫6h組與SAH組比組比，48h時水腫百分數(shù)達到78.74％（P<0.05）；SAH+利多卡因+亞低溫2h組與 SAH+利多卡因+亞低溫6h組比 P<0.05；SAH+利多卡因+亞低溫4h組與SAH+利多卡因+亞低溫6h組比P<0.05；差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。4、血腦

8、屏障滲透性測定結(jié)果：與對照組相比，SAH組血腦屏障破壞明顯，48h時測定皮層腦組織EB含量達到20.34ng/mg（P<0.05）；與SAH組相比，SAH+利多卡因+亞低溫2h治療組48h時測定皮層腦組織EB含量17.78ng/mg（P<0.05）；與SAH組相比，SAH+利多卡因+亞低溫4h治療組48h時測定皮層腦組織EB含量15.02ng/mg（P<0.05）；與SAH組相比，SAH+利多卡因+亞低溫6h治療組48h時測定皮層腦組織

9、EB含量12.45ng/mg（P<0.05）；SAH+利多卡因+亞低溫2h組與SAH+利多卡因+亞低溫6h組比P<0.05；SAH+利多卡因+亞低溫4h組與SAH+利多卡因+亞低溫6h組比P<0.05；差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。 5、神經(jīng)功能評分：SAH組神經(jīng)功能評分為2.6，與對照組相比明顯增加（P<0.05）；與SAH組相比，SAH+利多卡因+亞低溫2h組神經(jīng)功能評分2.1（P<0.05）；與SAH組相比SAH+利多卡因+亞低溫4h組神經(jīng)

10、功能評分1.5（P<0.05）；與SAH組相比較，SAH+利多卡因+亞低溫6h治療組神經(jīng)功能評分1.0（P<0.05）；SAH+利多卡因+亞低溫2h組與SAH+利多卡因+亞低溫6h組比P<0.05；SAH+利多卡因+亞低溫4h組與SAH+利多卡因+亞低溫6h組比P<0.05；差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。6、酶聯(lián)免疫吸附實驗結(jié)果顯示：對照組中的本實驗中檢測的三種細胞炎性因子IL-1β、TNF-α、IL-6表達水平較低；與對照組相比，SAH組三種炎

11、性因子表達顯著上升(P<0.05)；與SAH組相比，SAH+利多卡因+亞低溫2h組明顯降低（P<0.05）；與SAH組相比，SAH+利多卡因+亞低溫4h組顯著減少（P<0.05）；與SAH組相比，SAH+利多卡因+亞低溫6h治療組顯著降低（P<0.05）；SAH+利多卡因+亞低溫2h組與SAH+利多卡因+亞低溫6h組比P<0.05；SAH+利多卡因+亞低溫4h組與SAH+利多卡因+亞低溫6h組比P<0.05；差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。7、免疫

12、組化結(jié)果：7.1 ASK-1：與對照組相比，SAH組大鼠海馬組織ASK-1陽性細胞數(shù)量明顯增高；SAH組>利多卡因+亞低溫2h組>利多卡因+亞低溫4h>利多卡因+亞低溫6h組。7.2 HSP27：對照組大鼠皮質(zhì)區(qū)基本未見HSP27陽性染色細胞，與對照組相比，SAH組大鼠陽性細胞數(shù)量明顯增高；SAH組>利多卡因+亞低溫2h組>利多卡因+亞低溫4h>利多卡因+亞低溫6h組。
　　結(jié)論:1、通過構(gòu)建大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型，觀察到大鼠蛛網(wǎng)

13、膜下腔出血后48h時腦皮層水含量增加，血腦屏障破壞，提示蛛網(wǎng)膜下腔出血后存在早期腦損傷。同時，蛛網(wǎng)膜下腔出血誘導(dǎo)后可產(chǎn)生基底動脈痙攣。2、大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后，給予利多卡因枕大池注射并聯(lián)合亞低溫治療，該療法的神經(jīng)保護作用主要表現(xiàn)在能緩解基底動脈收縮的程度,降低血管內(nèi)皮細胞損傷，減少腦組織含水量，減少細胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的表達，減少神經(jīng)細胞凋亡，能增強對腦組織、神經(jīng)元保護作用。3、大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后，給予利多卡因枕大