加味小柴胡湯抗胃潰瘍的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、加味小柴胡湯是以我國(guó)醫(yī)圣張仲景所著《傷寒論》收載的―小柴胡湯‖為基本方，加味黃連、生姜、白術(shù)、茯苓等組成，具有和解少陽(yáng)、疏肝和胃之功效。近10余年來(lái)，東莞市中醫(yī)院周愛(ài)軍主任醫(yī)師運(yùn)用加味小柴胡湯臨床治療胃潰瘍病人數(shù)百例，有效率達(dá)到90％以上，具有起效快和復(fù)發(fā)率低的特點(diǎn)，受到廣大患者高度評(píng)價(jià)。本論文的研究?jī)?nèi)容是建立在臨床療效的基礎(chǔ)上，采用中藥化學(xué)、中藥藥理學(xué)、分子藥理學(xué)及分析化學(xué)等多學(xué)科交叉的研究方法，對(duì)加味小柴胡湯方劑進(jìn)行了抗?jié)冇行镔|(zhì)

2、部位篩選，以及有效物質(zhì)部位組方的藥效學(xué)和作用機(jī)理研究，并對(duì)各有效物質(zhì)部位的化學(xué)成分進(jìn)行了分析鑒定，初步詮釋了該方劑藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，并為將其開(kāi)發(fā)為中藥新品種提供了現(xiàn)代科學(xué)依據(jù)。
　　在我國(guó)傳統(tǒng)中醫(yī)和中藥理論的指導(dǎo)下，將加味小柴胡湯復(fù)方視為整體，采用傳統(tǒng)方法對(duì)其進(jìn)行水煎液總提物的提取。并根據(jù)其化學(xué)成分極性大小，采用系統(tǒng)溶劑法對(duì)其進(jìn)行部位的分離，將總提物分為揮發(fā)油物質(zhì)、氯仿萃取物（生物堿類物質(zhì)）、乙酸乙酯萃取物（酚酸類物質(zhì)）、正丁醇萃取物

3、（苷類物質(zhì)）、水溶性物質(zhì)和多糖等6個(gè)物質(zhì)部位。以抗幽門(mén)螺旋桿菌活性作為指標(biāo)，對(duì)全方水煎液及6個(gè)物質(zhì)部位進(jìn)行了生物活性篩選研究?？咕囼?yàn)結(jié)果表明，揮發(fā)油物質(zhì)（親脂性物質(zhì)）、氯仿萃取物（生物堿類物質(zhì)）、乙酸乙酯萃取物（酚酸類物質(zhì)）和正丁醇萃取物（苷類物質(zhì)）為加味小柴胡湯的有效物質(zhì)部位群。
　　建立無(wú)水乙醇誘導(dǎo)的小鼠胃潰瘍模型、幽門(mén)結(jié)扎所致胃潰瘍大鼠模型和醋酸誘導(dǎo)的大鼠慢性胃潰瘍模型，以加味小柴胡湯有效物質(zhì)部位配伍組方進(jìn)行了藥效學(xué)研究，

4、并設(shè)立傳統(tǒng)方法制備的加味小柴胡湯顆粒組進(jìn)行藥效學(xué)研究?？刮笣兯幚碓囼?yàn)結(jié)果表明，有效物質(zhì)部位配伍組和加味小柴胡湯顆粒組與模型組比較，均能顯著降低胃潰瘍指數(shù)、胃液總酸度和胃蛋白酶活性，提高SOD活力，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化物MDA升高。本項(xiàng)研究結(jié)果表明，加味小柴胡湯有效物質(zhì)配伍的藥理效果能反映原方劑的藥效作用。這對(duì)于采用現(xiàn)代科學(xué)方法闡釋中藥復(fù)方配伍協(xié)同作用的傳統(tǒng)理論具有一定的意義。
　　通過(guò)藥理學(xué)與分子生物學(xué)的學(xué)科交叉研究方法，以醋酸所致大

5、鼠胃潰瘍模型為研究對(duì)象，對(duì)加味小柴胡湯有效物質(zhì)部位組方的抗胃潰瘍作用機(jī)理進(jìn)行了研究。采用酶聯(lián)免疫法和硝酸還原酶法測(cè)定PGE2、TNF-α、EGF及 NO的含量，觀察其對(duì)炎癥及細(xì)胞的修復(fù)作用；采用Western blotting法，檢測(cè)Bax，Bcl-2，cleaved-caspase-3和 cleaved-PARP蛋白的表達(dá)，觀察其對(duì)細(xì)胞凋亡的影響；采用HE染色及免疫組化法，分析胃黏膜組織中HSP-70， p-AKT和PCNA蛋白的表達(dá)

6、，以評(píng)估其細(xì)胞修復(fù)作用。研究結(jié)果表明:①經(jīng)AIG給藥處理后的醋酸模型大鼠胃黏膜組織內(nèi)的PGE2、EGF及 NO的含量顯著升高，而TNF-α含量顯著性下降，顯示了抗炎和促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用；②Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示，AIG能上調(diào)醋酸模型大鼠胃黏膜組織中Bcl-2蛋白表達(dá)，下調(diào)Bax、 cleaved-caspase-3及cleaved-PARP蛋白表達(dá)，因而表明具有抑制細(xì)胞凋亡的作用；③免疫組化分析結(jié)果顯示，AIG可以

7、提高胃黏膜組織內(nèi)HSP-70， p-AKT和 PCNA蛋白的表達(dá)，因而顯示了對(duì)細(xì)胞損傷的修復(fù)作用。綜上所述，加味小柴胡湯有效部位群組方之所以具有良好的抗胃潰瘍的藥效作用，其作用機(jī)理是通過(guò)多途徑共同發(fā)揮作用的結(jié)果。因此本項(xiàng)研究結(jié)果為加味小柴胡湯的臨床療效提供了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　通過(guò)現(xiàn)代儀器分析方法，對(duì)加味小柴胡湯有效部位群的化學(xué)成分進(jìn)行了分析鑒定。采用GC-MS分析方法，從揮發(fā)油物質(zhì)部位中分離出84種成分，鑒定了其中65個(gè)化合物