表皮生長因子受體抑制劑通過降低炎癥和氧化應激緩解動脈粥樣硬化.pdf

1、背景及目的：
　　動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是一種嚴重危害人類健康的常見病，是腦血管病、冠心病和血栓栓塞性疾病等缺血性心腦血管疾病的主要病理基礎。到目前為止，AS的發(fā)病機制尚未完全清晰，存在多種學說，涉及多種危險因素以至臨床缺乏有效的防治藥物。大量臨床和基礎研究表明高脂血癥（oxLDL）是動脈粥樣硬化的重要致病因素。高脂血癥（oxLDL）損傷血管內皮細胞致使內皮細胞屏障功能破壞，并且在內皮損傷、異常的脂質

2、代謝、血流動力學損傷等損傷刺激下，多種炎癥因子、免疫機制及相關的細胞因子網絡交叉樣作用于血管壁，形成慢性炎癥。EGFR不僅在腫瘤、創(chuàng)傷愈合和纖維化等增生性疾病中發(fā)揮重要作用，也可介導多種代謝性疾病和心血管疾病的發(fā)生發(fā)展，并且目前已有多個EGFR小分子抑制劑或抗體應用于臨床腫瘤治療。然而，在高血脂狀態(tài)下，EGFR在動脈粥樣硬化中的作用依然鮮有報道。更重要的是，一些重要的高血脂元素如何激活EGFR，以及EGFR如何介導高脂誘導細胞損傷的上下

3、游機制尚不清楚。本文意在探討EGFR是否參與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展及其參與機制。
　　方法：
　　1.在分子和細胞層面，利用激酶篩選和Western Bloting方法初步評價我們的化合物542是否為EGFR特異性抑制劑；在細胞層面，利用Western Bloting方法、RT-PCR方法、流式細胞術、免疫熒光方法、ELISA方法和免疫共沉淀方法檢測ox-LDL對原代巨噬細胞或主動脈平滑肌細胞的氧化應激、炎癥與細胞泡沫化的影

4、響，并檢測化合物542對ox-LDL誘導的上述作用是否有效;
　　2.在動物層面上，高脂飲食（HFD）誘導APOE-/-小鼠形成動脈粥樣硬化模型，給予高脂飲食（HFD）喂養(yǎng)的APOE-/-小鼠一定劑量的EGFR抑制劑AG1478和542（10mg/kg）灌胃治療。16周后處死小鼠，運用生化檢測試劑盒檢測小鼠各項生化指標；運用Western Bloting方法、RT-PCR方法、組織染色方法、免疫組化方法和免疫熒光方法檢測小鼠動脈各

5、項病理情況以及相關信號通路蛋白和基因的表達。
　　結果：
　　1.化合物542是特異性EGFR抑制劑;
　　2.化合物542可明顯緩解體外氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）誘導的原代巨噬細胞和血管平滑肌細胞的炎癥信號通路的激活以及氧化應激、細胞泡沫化;
　　3.化合物542可明顯緩解ApoE敲除小鼠動脈粥樣硬化的發(fā)展，并且在細胞實驗中證實EGFR能夠明顯抑制oxLDL引起巨噬細胞的炎癥反應與泡沫化。
　　結