母嬰分離大鼠恐懼記憶易感性差異表達(dá)基因的篩選.pdf

1、目的：
　　創(chuàng)傷后應(yīng)激障礙(Posttraumatic Stress Disorder,PTSD)存在較多的易感因素,包括性別、年齡、種族、遺傳因素、父母PTSD病史及早期的不良經(jīng)歷等,生命早期不良應(yīng)激作為重要的易感因素之一,逐漸引起大家的關(guān)注。研究生命早期不良應(yīng)激這一環(huán)境因素導(dǎo)致基因表達(dá)的改變,為危險(xiǎn)兒童人群的預(yù)防及PTSD的治療尋找有效的藥物作用及心理干預(yù)靶點(diǎn),具有重要的意義。因此,本課題采用母嬰分離動(dòng)物模型及場(chǎng)景恐懼記憶動(dòng)物

2、模型和抑制消減雜交的方法,研究生命早期不良應(yīng)激致成年后恐懼記憶易感性改變的相關(guān)差異表達(dá)基因,并分析差異表達(dá)基因在易感性機(jī)制中的可能作用,探索母嬰分離對(duì)成年后恐懼記憶的形成和保持的易感性的影響。
　　方法：
　　第一部分:
　　1、母嬰分離動(dòng)物模型:
　　幼鼠出生后第1-21天,將所有幼鼠拎出放入另一籠中,6h后將新生幼鼠送回籠中與母鼠團(tuán)聚,出生后第21天每籠6只飼養(yǎng)。正常對(duì)照組大鼠出生后按正常飼養(yǎng),不與母鼠分離。

3、21天后斷奶,每籠6只飼養(yǎng)。
　　2、場(chǎng)景恐懼記憶動(dòng)物模型:
　　訓(xùn)練:將大鼠輕輕放到大鼠測(cè)試籠中,讓其自由活動(dòng)180秒,然后給予大鼠足部電擊2秒(非條件刺激,US),0.8mA,共三次,每次間隔60秒。訓(xùn)練結(jié)束后,大鼠在訓(xùn)練箱中繼續(xù)停留60秒,然后將其送回飼養(yǎng)籠。訓(xùn)練結(jié)束后1小時(shí)和24小時(shí),分別進(jìn)行場(chǎng)景恐懼記憶保持能力的檢測(cè)。
　　3、空間學(xué)習(xí)記憶檢測(cè):
　　前4天為訓(xùn)練階段,每天訓(xùn)練4次,把大鼠面向池壁隨機(jī)從

4、任一象限放入池中,并記錄大鼠尋找暗藏的平臺(tái)時(shí)間(逃避潛伏期)以及上站臺(tái)前路程,找到平臺(tái)后允許動(dòng)物在平臺(tái)上停留30s;如果大鼠在90s內(nèi)未找到平臺(tái),記為90s。每日4次成績(jī)的平均值為當(dāng)日成績(jī)。第5天,轍除站臺(tái),記錄大鼠在90s內(nèi)的游泳軌跡,分別計(jì)算其跨越目標(biāo)象限內(nèi)的游泳時(shí)間和路程占整個(gè)游泳時(shí)間的百分率。
　　第二部分:
　　應(yīng)用抑制消減雜交技術(shù)(Suppression subtractive hybridization,SSH

5、)篩選母嬰分離組和正常組成年大鼠場(chǎng)景性恐懼記憶之后差異表達(dá)基因,將獲得的序列進(jìn)行同源性比較。
　　結(jié)果：
　　1、行為學(xué)結(jié)果:
　　雌性大鼠在電擊之前母嬰分離組場(chǎng)景恐懼記憶的獲得強(qiáng)于正常組,電擊之后,母嬰分離組場(chǎng)景恐懼記憶的獲得弱于正常組。而雄性大鼠在電擊之前和電擊之后場(chǎng)景性恐懼記憶的獲得的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　場(chǎng)景恐懼記憶的保持,1h后短時(shí)記憶的檢測(cè),雌性大鼠母嬰分離組僵直時(shí)間明顯低于正常組(P<0.01)

6、;雄性大鼠母嬰分離組僵直時(shí)間與正常組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.673)。同時(shí)母嬰分離對(duì)成年后場(chǎng)景恐懼記憶的保持存在性別差異,母嬰分離組雌性大鼠僵直時(shí)間明顯低于雄性大鼠(P<0.01)。
　　24h長(zhǎng)時(shí)記憶檢測(cè),在恐懼記憶訓(xùn)練后,雌性大鼠母嬰分離組僵直時(shí)間明顯低于正常組(P<0.01);雄性大鼠母嬰分離組僵直時(shí)間與正常組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.093)。同時(shí)母嬰分離對(duì)成年后場(chǎng)景性恐懼記憶的保持存在性別差異,母嬰分離組雌性大

7、鼠僵直時(shí)間明顯低于雄性大鼠(P<0.01)。
　　空間學(xué)習(xí)記憶檢測(cè)結(jié)果:雌性和雄性大鼠母嬰分離組潛伏期、上臺(tái)前路程與對(duì)應(yīng)的對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;在空間探索實(shí)驗(yàn)中,雌、雄性大鼠母嬰分離組目標(biāo)象限停留時(shí)間的百分比、目標(biāo)象限停留距離的百分比均與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、SSH結(jié)果:
　　獲得9個(gè)上調(diào)表達(dá)的基因,其中5個(gè)為已知基因的部分序列,1個(gè)為新EST序列,此基因表達(dá)均是在母嬰分離的基礎(chǔ)上獲得。