PCSK9靶向重組疫苗設計及降膽固醇效果初步評價.pdf

1、前蛋白轉化酶枯草桿菌蛋白酶9型（Proprotein convertase subtilisin/kexin type9，PCSK9）是機體內調節(jié)低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）代謝的重要蛋白之一。目前研究發(fā)現(xiàn)，PCSK9通過介導LDLR的降解，間接調節(jié)了血清中LDL-C的含量，并且抑制PCSK9能夠顯著地降低血清LDL-C的水平，所以PCSK9是近年來高膽固醇血癥及動脈粥樣硬化的熱門治療靶點。本研究目的是構建靶向PCSK9的重組疫苗，

2、為降膽固醇疫苗藥物的開發(fā)提供實驗基礎。
　　本課題選取PCSK9關鍵候選表位（153-163和370-383）以及催化結構域作為候選疫苗的關鍵元件。首次將PCSK9表位或結構域移植到白喉毒素跨膜結構域（DTT）的loop區(qū)或羧基末端，構建成重組表位疫苗或結構域疫苗。利用重疊PCR進行原核載體構建，并進行原核表達及純化，制備得到了5個重組疫苗蛋白（PCSK9-1，PCSK9-2，PCSK9-3，PCSK9-6，PCSK9-7）。免疫

3、BALB/c小鼠后通過ELISA檢測血清抗體效價，Western Blot方法檢測血清抗體與 mPCSK9及hPCSK9結合的特異性，酶偶聯(lián)比色法檢測各組小鼠膽固醇水平。結果顯示，在小鼠體內疫苗PCSK9-1、PCSK9-6和PCSK9-7能夠激發(fā)免疫反應，產生針對hPCSK9和mPCSK9的特異性的抗體，其中PCSK9-1、PCSK9-7抗hPCSK9抗體的效價分別為和1:5000和1:100000。并且免疫后PCSK9-1、PCSK