一種基于二氧化硅微球載體化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)方法的建立及其應(yīng)用評價.pdf

1、目的:1.建立二氧化硅微球載體結(jié)合化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)檢測人IgG方法;2.應(yīng)用二氧化硅微球載體結(jié)合化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)建立一種用于檢測癌胚抗原(CEA)的方法;3.對所建方法進(jìn)行應(yīng)用評價。
　　方法:1.采用碳二亞胺(EDC)/N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)化學(xué)偶聯(lián)的方法將羊抗人IgG包被于直徑為1mm的二氧化硅微球表面，進(jìn)行包被蛋白濃度、HRP檢測抗體稀釋度的優(yōu)化，并將偶聯(lián)有羊抗人IgG的微球裝載于毛細(xì)玻管中進(jìn)行雙抗體夾心反應(yīng)，進(jìn)行

2、蛋白反應(yīng)時間、流速對蛋白之間結(jié)合效率的影響等方面的優(yōu)化;2.采用碳二亞胺(EDC)/N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)化學(xué)偶聯(lián)的方法將鼠抗人CEA包被于直徑為1mm的二氧化硅微球表面，將其裝載于毛細(xì)玻璃管中，在微量注射泵的輔助作用下，用雙抗體夾心酶免疫法檢測CEA。3.通過臨床樣品檢測對所建方法的靈敏度、特異性、精密度、回收率等性能進(jìn)行初步評價。
　　結(jié)果:1.采用EDC/NHS化學(xué)偶聯(lián)的方法包被羊抗人IgG的最佳濃度為2.6μg/mL

3、，HRP檢測抗體稀釋度為1∶1000，偶聯(lián)后的二氧化硅微球進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗，結(jié)果與商業(yè)化的試劑盒一致;在微量注射泵的輔助作用下，蛋白之間的結(jié)合在20min即可達(dá)到平臺期，流速狀態(tài)增加了蛋白之間的碰撞機(jī)會，新方法可以在30min內(nèi)檢測到人IgG的最低濃度為0.50ng/mL;2.將偶聯(lián)有鼠抗人CEA的微球裝載于毛細(xì)玻璃管中進(jìn)行CEA的檢測，新方法可在30min內(nèi)完成檢測CEA，最低檢測濃度達(dá)0.54ng/mL，與高濃度甲胎蛋白、間皮素

4、無明顯交叉反應(yīng)，批內(nèi)、批間CV為10.53％～14.22％，回收率為91.2％～104.65％，與電化學(xué)發(fā)光酶免疫分析結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義（t=0.533，P=0.597），且成正相關(guān)(r=0.98 P＜0.01)。
　　結(jié)論:1.二氧化硅微球作為載體進(jìn)行ELISA反應(yīng)，成本較低，同時也節(jié)約蛋白試劑，在微量注射泵的作用下，蛋白之間的反應(yīng)加速，可以節(jié)約反應(yīng)時間，采用化學(xué)發(fā)光酶免疫技術(shù)，靈敏度較好，線性范圍比較廣;2.基于微流控和化學(xué)