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1、本文分以下幾個(gè)章節(jié)進(jìn)行探討:
第一章系統(tǒng)地綜述了中藥配伍相互作用研究方法與進(jìn)展。
第二章 實(shí)驗(yàn)用樣品的制備
基于對(duì)中醫(yī)方劑數(shù)據(jù)挖掘結(jié)果和統(tǒng)計(jì)分析需要,選擇7個(gè)不同配比當(dāng)歸-紅花(4∶1、2∶1、3∶2、1∶1、2∶3、1∶2、1∶4)及當(dāng)歸、紅花單味藥,按比例稱取酒當(dāng)歸和紅花,混合,共4.5 kg,以上樣品采用熱回流水提法進(jìn)行提取,得制各樣品為DG、GH4∶1、GH2∶1、GH3∶2、GH1∶1、GH2∶3
2、、GH1∶2、GH1∶4、HH,冷藏備用。
第三章 當(dāng)歸-紅花不同量比養(yǎng)血活血效應(yīng)比較研究
第一節(jié) 當(dāng)歸-紅花不同劑量的養(yǎng)血補(bǔ)血作用的比較研究
觀察當(dāng)歸、紅花兩藥味不同配比對(duì)血虛小鼠的補(bǔ)血作用差異,優(yōu)選當(dāng)歸-紅花配伍補(bǔ)血作用的最佳配比。采用乙酰苯肼與環(huán)磷酰胺聯(lián)合造模法復(fù)制小鼠血虛模型。基于多指標(biāo)綜合指數(shù)法,首先以《中醫(yī)方劑大辭典》數(shù)據(jù)庫(kù)中出現(xiàn)頻次最高的當(dāng)歸-紅花1∶1配比為代表,優(yōu)選當(dāng)歸、紅花配伍補(bǔ)血作用的
3、最佳濃度;然后采用優(yōu)選的最佳濃度來(lái)觀察當(dāng)歸、紅花不同配比的補(bǔ)血作用變化規(guī)律。結(jié)果發(fā)現(xiàn),在5個(gè)不同濃度(分別為當(dāng)歸、紅花臨床等效量的1、2、3、4、5倍)下,當(dāng)歸-紅花劑量為臨床等效量時(shí)的總補(bǔ)血效應(yīng)最好;在當(dāng)歸、紅花的9個(gè)不同配比(1∶0、4∶1、2∶1、3∶2、1∶1、2∶3、1∶2、1∶4和0∶1)中,以當(dāng)歸-紅花1∶1的總補(bǔ)血效應(yīng)最好。該結(jié)果與中醫(yī)方劑中使用當(dāng)歸、紅花1∶1頻次最高的用藥規(guī)律相一致,為現(xiàn)代臨床更有效應(yīng)用當(dāng)歸與紅花提供
4、了科學(xué)依據(jù)。
第二節(jié) 當(dāng)歸-紅花不同劑量的活血化瘀作用比較研究
聯(lián)合應(yīng)用冰水浴和皮下注射鹽酸腎上腺素,復(fù)制大鼠血瘀模型,通過(guò)測(cè)定全血黏度、血漿黏度、全血高切相對(duì)指數(shù)、全血低切相對(duì)指數(shù)、紅細(xì)胞聚集指數(shù),觀察當(dāng)歸-紅花配伍對(duì)血瘀大鼠血液流變學(xué)的影響;然后采用多指標(biāo)綜合指數(shù)法綜合評(píng)價(jià)當(dāng)歸-紅花配伍的總活血化瘀效應(yīng)。結(jié)果顯示,與正常組相比,模型組各指標(biāo)均具有顯著性差異;不同濃度的當(dāng)歸-紅花提取液均能較好的改善急性血瘀大鼠的血
5、液流變學(xué)各指標(biāo)。采用多指標(biāo)綜合指數(shù)法綜合評(píng)價(jià)不同濃度的當(dāng)歸-紅花提取液的總活血化瘀效應(yīng)值大小順序?yàn)?GH3>GH1>GH4>GH2>GH5。以上結(jié)果說(shuō)明,不同濃度的當(dāng)歸-紅花提取液對(duì)血瘀大鼠均有一定的活血化瘀作用,其中以GH3的活血化瘀效果最優(yōu),及當(dāng)歸、紅花配伍比例為1∶1時(shí),濃度為臨床用藥劑量的3倍量時(shí)活血化瘀效果最好。
第三節(jié) 當(dāng)歸-紅花不同配比的活血化瘀作用比較研究
為了比較評(píng)價(jià)當(dāng)歸-紅花(GH)不同配比對(duì)急性
6、血瘀大鼠血液流變學(xué)和凝血功能的影響,優(yōu)選當(dāng)歸-紅花配伍活血作用的最佳配比。本實(shí)驗(yàn)采用皮下注射鹽酸腎上腺素和冰水游泳共同復(fù)制急性血瘀大鼠模型,通過(guò)測(cè)定全血黏度、血漿黏度、全血高切相對(duì)指數(shù)、全血低切相對(duì)指數(shù)、紅細(xì)胞聚集指數(shù),觀察當(dāng)歸-紅花配伍對(duì)血瘀大鼠血液流變學(xué)的影響;通過(guò)測(cè)定凝血酶原時(shí)間(PT)、凝血酶時(shí)間(TT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、血漿纖維蛋白原(FIB)含量及血小板最大聚集率(ADP),觀察當(dāng)歸-紅花配伍對(duì)血瘀大鼠凝血
7、功能及血小板聚集的影響。然后采用主成分分析法和多指標(biāo)綜合指數(shù)法綜合評(píng)價(jià)當(dāng)歸-紅花配伍的總活血化瘀效應(yīng)。結(jié)果顯示,與正常組比較,模型組各血液流變學(xué)指標(biāo)和凝血功能指標(biāo)均有顯著性差異;與模型組比較,當(dāng)歸-紅花7個(gè)不同配比組及單味藥(DG、HH)組均能較好的改善急性血瘀大鼠的血液流變學(xué)各指標(biāo),對(duì)凝血功能多個(gè)指標(biāo)也有較好的調(diào)節(jié)作用。主成分分析法和多指標(biāo)綜合指數(shù)法綜合評(píng)價(jià)得出,當(dāng)歸-紅花配比1∶1和3∶2的活血化瘀作用最好,其中1∶1的活血化瘀作用
8、更優(yōu)于3∶2。以上結(jié)果說(shuō)明,當(dāng)歸-紅花配伍能明顯改善血瘀大鼠的血液流變學(xué)及凝血功能異常,且當(dāng)歸-紅花活血化瘀作用的最佳配比與臨床中醫(yī)方劑中使用當(dāng)歸、紅花1∶1頻次最高的結(jié)論相一致,為臨床更有效應(yīng)用當(dāng)歸-紅花配伍提供了科學(xué)依據(jù)。
第四節(jié) 當(dāng)歸-紅花的抗氧化量效關(guān)系研究
采用DPPH、ABTS、OH·自由基清除法及FRAP法,比較當(dāng)歸-紅花不同配比不同劑量組的抗氧化能力。結(jié)果顯示,當(dāng)歸一紅花配比相同劑量不同時(shí),高劑量組(
9、100 mg/mL)對(duì)DPPH、ABTS、OH·自由基有較強(qiáng)的清除率,對(duì)Fe3+有較強(qiáng)的還原作用,且對(duì)DPPH、ABTS自由基的清除率及對(duì)Fe3+的還原作用呈一定的量效關(guān)系。
第五節(jié) 當(dāng)歸-紅花的抗凝血量效關(guān)系研究
本實(shí)驗(yàn)分別研究了當(dāng)歸-紅花(GH)不同配比不同劑量組對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小板聚集的影響及對(duì)TT、PT、APTT的延長(zhǎng)作用、對(duì)FIB含量的降低作用。結(jié)果表明,與空白組比較,除當(dāng)歸組外,其他各組對(duì)ADP誘導(dǎo)的血小
10、板聚集率有顯著降低作用,且呈一定的量效關(guān)系;與空白組比較,各配比高劑量組(0.50 g/mL)對(duì)PT均有顯著延長(zhǎng)作用,且除了GH1∶2、GH2∶3、GH2∶1組外,其他各組均呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系;與空白組比較,各配伍組對(duì)TT的延長(zhǎng)作用呈現(xiàn)一定的劑量關(guān)系;實(shí)驗(yàn)各組對(duì)新西蘭大耳白兔體外血漿中FIB的含量均有顯著降低作用,且相同配比不同劑量組間呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。
第四章 當(dāng)歸-紅花配伍在血虛/血瘀大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物比較研究
11、 第一節(jié) 當(dāng)歸-紅花配伍在血虛大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物比較研究
采用UHPLC-QTOF/MS聯(lián)用技術(shù),通過(guò)能量梯度(MSE)和質(zhì)量虧損過(guò)濾(MDF)方法,對(duì)灌胃給藥歸紅藥對(duì)及其組成藥味提取物后血虛大鼠血漿、尿液和膽汁中阿魏酸、咖啡酸、羥基紅花黃色素A和6-羥基山奈酚3-O-β-D葡萄糖苷4種效應(yīng)成分的代謝轉(zhuǎn)化特征進(jìn)行分析。共鑒定得到阿魏酸代謝產(chǎn)物9個(gè),血漿中3個(gè),尿液中9個(gè),膽汁中4個(gè);主要為去羰基、還原、甲基化、水合、二次甲基化
12、、甲基化加水合、乙?;?、硫酯化、一分子葡萄糖醛酸結(jié)合代謝產(chǎn)物??Х人岽x產(chǎn)物9個(gè),血漿中5個(gè),尿液中6個(gè),膽汁中8個(gè);主要為還原、甲基化、水合、二次甲基化、乙?;?、硫酯化、甲基化加硫酯化、一分子葡萄糖醛酸結(jié)合、甲基化加一分子葡萄糖醛酸結(jié)合代謝產(chǎn)物。羥基紅花黃色素A代謝產(chǎn)物8個(gè),血漿中3個(gè),尿液中7個(gè),膽汁中3個(gè);主要為甲基化、羥基化、水合、乙酰化、硫酯化、甘氨酸結(jié)合、牛磺酸結(jié)合、一分子葡萄糖醛酸結(jié)合代謝產(chǎn)物。6-羥基山奈酚3-O-β-D
13、葡萄糖苷代謝產(chǎn)物6個(gè),血漿中2個(gè),尿液中5個(gè),膽汁中4個(gè);主要為脫C6H12O5、乙酰化、甲基化、脫C6H12O5加乙?;⒚揅6H12O5加一分子葡萄糖醛酸結(jié)合、脫C6H12O5加兩分子葡萄糖醛酸結(jié)合代謝產(chǎn)物。結(jié)果說(shuō)明,歸紅藥對(duì)及其組成藥味提取物中主要有效成分在血虛大鼠體內(nèi)存在多種Ⅰ相和Ⅱ相代謝產(chǎn)物,為闡明該藥對(duì)及其組成藥味在體內(nèi)發(fā)揮療效的功效物質(zhì)基礎(chǔ)提供依據(jù)。
第二節(jié) 當(dāng)歸-紅花配伍在血瘀大鼠體內(nèi)的代謝產(chǎn)物比較研究
14、 采用UHPLC-QTOF/MS聯(lián)用技術(shù),通過(guò)能量梯度(MSE)和質(zhì)量虧損過(guò)濾(MDF)方法,對(duì)灌胃給藥歸紅藥對(duì)及其組成藥味提取物后血瘀大鼠血漿、尿液和膽汁中阿魏酸、綠原酸、羥基紅花黃色素A和對(duì)香豆酸4種效應(yīng)成分的代謝轉(zhuǎn)化特征進(jìn)行分析。
第五章 基于代謝組學(xué)的當(dāng)歸-紅花養(yǎng)血活血作用機(jī)理研究
第一節(jié) 基于代謝組學(xué)的當(dāng)歸-紅花養(yǎng)血補(bǔ)血作用機(jī)理研究
采用乙酰苯肼和環(huán)磷酰胺復(fù)合法復(fù)制大鼠血虛模型,將大鼠分為模型組
15、、正常組、當(dāng)歸組、紅花組、歸紅組,運(yùn)用超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜(UPLC-Q-TOF/MS)技術(shù),對(duì)各組大鼠尿液與血漿中內(nèi)源性代謝物進(jìn)行測(cè)定,采用監(jiān)督模式識(shí)別方法正交信號(hào)校正結(jié)合偏最小二乘法-判別分析(OPLS-DA)對(duì)多變量數(shù)據(jù)進(jìn)行分析,t檢驗(yàn)方法進(jìn)行顯著性統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果表明,模式識(shí)別中模型組大鼠能較好地與其他組分開(kāi);進(jìn)一步從模型組大鼠尿液及血漿代謝圖譜中定性鑒定出犬尿氨酸、苯丙氨酸、煙酸、鞘氨醇、異亮氨酸、酪氨酸和5-
16、羥色胺潛在代謝生物標(biāo)志物,這些內(nèi)源性物質(zhì)在各給藥組大鼠體內(nèi)得到了不同程度的恢復(fù),通過(guò)獨(dú)特通路分析,找到了苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成,纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸的生物合成,色氨酸代謝和酪氨酸代謝等多條血虛證代謝通路。以上結(jié)果顯示,歸紅藥對(duì)對(duì)血虛大鼠的治療作用可能與10個(gè)血虛證代謝通路的調(diào)節(jié)有關(guān),代謝組學(xué)在中藥的療效和機(jī)制研究中是一種很有前途的工具。
第二節(jié) 基于代謝組學(xué)的當(dāng)歸-紅花活血化瘀作用機(jī)理研究
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