C反應蛋白在2型糖尿病伴慢性牙周炎中作用機制初探.pdf

1、研究背景:
　　 牙周炎是由牙菌斑微生物引起的感染性疾病,可導致牙齦炎癥、牙周袋形成、進行性牙周附著喪失和牙槽骨破壞。雖然牙菌斑是牙周炎發(fā)病的始動因子,但是單從菌斑微生物角度不足以解釋疾病嚴重程度的差異。越來越多證據(jù)表明某些危險因素(如系統(tǒng)性疾病和遺傳因素)并不直接導致牙周炎的發(fā)生,而是影響其嚴重程度。已有研究表明,糖尿病患者患牙周炎的風險明顯高于健康人。
　　 糖尿病是一種多病因的代謝性疾病,其中2型糖尿病是主要類型,

2、臨床上多見于35～40歲以后,占所有糖尿病的90％～95％。長期以來,胰島功能損傷和胰島素抵抗一直被認為是2型糖尿病發(fā)病的兩個關(guān)鍵因素,但近年來的研究認為2型糖尿病是機體天然免疫系統(tǒng)啟動的細胞因子介導的炎癥反應,炎癥在2型糖尿病的發(fā)病機制中起媒介作用。
　　 目前研究已證實炎癥在胰島素抵抗和胰島β細胞損傷的發(fā)生過程中起重要作用；而炎癥在牙周炎進展中的作用已得到充分肯定。C反應蛋白(CRP)是臨床上廣泛使用的炎癥標志物之一,它已被

3、證實與牙周炎和糖尿病的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。研究表明:牙周炎可引起血清CRP濃度升高,其嚴重程度與血清CRP濃度呈正相關(guān)；CRP又是2型糖尿病的重要預測因子。血清CRP水平升高是牙周炎和糖尿病的共性反應,它為探究二者內(nèi)在聯(lián)系開啟了新的領域。那么CRP是牙周炎影響全身健康的“交通使者”呢?還是僅僅在糖尿病性牙周炎的發(fā)生發(fā)展中作為炎癥反應標志物而存在呢?
　　 C反應蛋白是一種急性時相蛋白,在細胞因子IL-1β、IL-6、TNF—α、干擾素

4、、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF—β)等誘導下主要由肝臟細胞合成,外周血淋巴細胞也可少量產(chǎn)生。在組織受到損傷、感染或腫瘤破壞時,血清CRP濃度可以在數(shù)小時內(nèi)急劇上升,病情改善后可逐漸下降,至恢復正常。它可增強白細胞反應性、補體的固定及炎癥部位細胞碎片的清除,具有免疫識別特性及免疫調(diào)節(jié)功能,是亞臨床系統(tǒng)感染的一項敏感性指標。
　　 研究發(fā)現(xiàn)遺傳和環(huán)境因素共同影響CRP水平,其中遺傳因素可解釋個體間CRP水平差異的35％～40％。多群體的大

5、樣本研究表明CRP基因多態(tài)性與其血清基線水平顯著相關(guān)。目前,已發(fā)現(xiàn)將近40種CRP單核苷酸多態(tài)性,部分SNPs或其單倍型已被證實與血漿CRP水平有相關(guān)性。而CRP基因多態(tài)性與系統(tǒng)性疾病的相關(guān)研究中涉及較多的是其與心血管類疾病間的相關(guān)關(guān)系。C反應蛋白基因多態(tài)性與糖尿病和牙周炎的研究相對匱乏。
　　 本研究通過檢測CRP和HbAlc基線水平及CRP基因多態(tài)性的分布,探討CRP基因多態(tài)性與2型糖尿病伴慢性牙周炎人群血清CRP和HbAl

6、c基線水平的相關(guān)性:通過分析CRP SNPs與牙周基礎治療前后該人群CRP與HbAlc水平的縱向改變的相關(guān)性,探討不同遺傳背景的牙周炎患者對牙周基礎治療的反應性與敏感性差異。
　　 第一章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反應蛋白基因多態(tài)性與血清C反應蛋白基線水平的相關(guān)性研究
　　 目的:
　　 檢測中國廣州漢族2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中血清CRP水平及CRP基因多態(tài)性的分布；探討CRP基因多態(tài)性與該人群血清CR

7、P基線水平的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 本章共納入135名受試者,均來自廣州市三級甲等醫(yī)院門診在2008年9月至2009年9月期間的門診病人。納入標準:①糖尿病確診1年以上,糖尿病病情穩(wěn)定,用藥2個月內(nèi)無變化,無嚴重并發(fā)癥；②患有慢性牙周炎,全口存留≥16顆牙齒,且未經(jīng)過系統(tǒng)牙周治療,1年內(nèi)未接受過潔治。排除標準:①患有影響牙周健康的其他系統(tǒng)性疾病,如冠心病等；②除牙周炎外,身體其他部位存在活動性炎癥；③調(diào)查前4周內(nèi)服

8、用抗生素；④妊娠期、哺乳期或治療期間計劃懷孕；⑤拒絕參加本研究。所有受試者于早晨8～10點間采集空腹靜脈血,檢測血清高敏C反應蛋白(hsCRP)濃度。
　　 采用基因組DNA試劑盒提取所有受試者的外周血DNA。采用直接測序法和多聚酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性(PCR—RFLP)法測定C反應蛋白CRP-757 T>C,-717 A>G,-409 G>A,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444 C>T位點的基因型,檢

9、測2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中CRP各基因型。
　　 采用Kruskal Wallis檢驗和Mann—Whitney檢驗分析CRP各位點不同基因型間CRP濃度的差異。如果有差異,則根據(jù)hsCRP的中位數(shù),把研究對象分為兩組,通過x2檢驗分析兩組間等位基因頻率的差異。
　　 結(jié)果:
　　 1.CRP SNPs Hardy-Wainberg平衡檢驗
　　 CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C

10、>A>T,+1059 G>C和+1444 C>T各位點基因型頻率在本研究人群中分布符合Hardy—weinberg平衡(P>0.05)
　　 2.CRP基因型及等位基因在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中的分布
　　 CRP各位點主要基因型:-757 T>C的TT基因型；-717 A>G的AA基因型；-286 C>A>T的CC基因型；+1059 G>C的GG基因型；+1444 C>T的CC基因型。-409 G>A位點只檢測到G

11、G一種基因型；+1059 G>C未發(fā)現(xiàn)CC基因型。
　　 3.CRP基因各位點間的連鎖不平衡分析
　　 在本研究2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中-286 C>A>T和-757 T>C存在較強的連鎖不平衡(r2=0.648)。
　　 4.CRP基因各位點間的單倍型分析
　　 本研究中發(fā)現(xiàn)5種有效單倍型(CAAGC,TACCC,TACGC,TATGT和TGCGC)其中TACGC(占51.0％)是主要的單倍型。

12、r>　　 5.CRP基因多態(tài)性與血清CRP基線水平的相關(guān)性
　　 CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T這三種多態(tài)性不同基因型間的血清CRP濃度的差異有統(tǒng)計學意義；其余兩基因多態(tài)性+1059 G>C和+1444 C>T不同基因間的血清CRP濃度的差異有統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 高濃度hsCRP(>50％)組-757 T>C C等位基因,-717 A>G的A等位基因和-286 C>A>T

13、的A等位基因的攜帶率顯著高于低濃度hsCRP組。
　　 第二章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反應蛋白基因多態(tài)性與HbAlc基線水平相關(guān)性的研究
　　 目的:
　　 探討中國廣州漢族2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反應蛋白基因多態(tài)性與HbAlc基線水平的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 研究對象、CRP基因型的檢測同第一章。
　　 所有受試者檢測HbAlc水平。采用Kruskal Wallis檢

14、驗和Mann—Whitney檢驗分析CRP各位點不同基因型間HbAlc基線水平的差異。
　　 結(jié)果:
　　 本研究中CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444C>T不同基因型間HbAlC基線水平的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 第三章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中C反應蛋白基因多態(tài)性與牙周基礎治療后血清CRP水平變化的相關(guān)性研究
　　 目的:<

15、br>　　 初步探討中國廣州漢族人群2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中CRP基因多態(tài)性與牙周基礎治療后hsCRP水平變化的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 本章納入90例患者在基線時接受牙周非手術(shù)治療,包括口腔衛(wèi)生宣教(OHI)、全口潔刮治、根面平整、調(diào)牙合、拔除無法保留的患牙；在3個月和6個月時行牙周維護治療,包括口腔衛(wèi)生宣教及常規(guī)齦上下潔刮治。6個月復診時再次檢測血清hsCRP水平。CRP基因型分析同第一章。
　　

16、采用Kruskal Wallis檢驗和Mann—Whitney檢驗分析CRP各位點不同基因型與牙周基礎治療前后hsCRP水平變化的差異。
　　 結(jié)果:
　　 本研究中CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444C>T不同基因型間hsCRP水平變化的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 第四章在2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中
　　 C反應蛋白基因多態(tài)性與牙

17、周基礎后療后HbAlc水平變化的相關(guān)性研究
　　 目的:
　　 初步探討中國廣州漢族人群2型糖尿病伴慢性牙周炎人群中CRP基因多態(tài)性與牙周基礎治療后HbAlc水平變化的相關(guān)性。
　　 方法:
　　 CRP基因型的檢測及牙周非手術(shù)治療同第一章。
　　 6個月復診時再次檢測HbAlc血清水平。
　　 采用Kruskal Wallis檢驗和Mann—Whitney檢驗分析CRP各位點不同基因型與

18、牙周基礎治療前后HbAlc水平變化的差異。
　　 結(jié)果:
　　 本研究中CRP+1444 C>T位點不同基因型間HbAlc水平變化的差異有統(tǒng)計學意義,TT+TC基因型攜帶者的HbAlc水平的變化較大。
　　 -757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T和+1059 G>C位點不同基因型間HbAlc水平變化的差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 全文總結(jié):
　　 1、中國漢族2型糖尿

19、病伴慢性牙周炎人群中CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T多態(tài)性與血清CRP基線水平相關(guān)；-757 T>C C等位基因,-717 A>G的A等位基因,-286 C>A>T的A等位基因與高水平CRP相關(guān)。
　　 2、2型糖尿病伴慢性牙周炎患者CRP+1444 C>T位點多態(tài)性與牙周基礎治療后HbAlc水平的變化有關(guān),TC+TT基因型攜帶者對牙周基礎治療反應較敏感。
　　 3、尚不能認為2型糖尿病伴慢

20、性牙周炎患者CRP+1059 G>C,+1444 C>T位點多態(tài)性與血清CRP基線水平有關(guān)。
　　 4、尚不能認為2型糖尿病伴慢性牙周炎患者CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444 C>T位點多態(tài)性與HbAlc基線水平有關(guān)。
　　 5、尚不能認為2型糖尿病伴慢性牙周炎患者CRP-757 T>C,-717 A>G,-286 C>A>T,+1059 G>C和+1444 C