miRNA-221-222對非小細(xì)胞肺癌增殖作用的研究.pdf

1、非小細(xì)胞肺癌是一種常見的肺部惡性腫瘤，在全世界范圍內(nèi)，其發(fā)病率與死亡率在各種惡性腫瘤中均位居前列。然而，非小細(xì)胞肺癌發(fā)生的分子機制目前尚不清楚，對它的預(yù)防和治療仍然缺乏有效的手段。因此，深入探究其潛在的分子機制顯得尤為重要。微小RNA（microRNA，miRNA）已被證實參與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生與發(fā)展過程，大量的前期研究顯示，微小RNA221/222（miR-221/222）在非小細(xì)胞肺癌組織中表達(dá)升高。在人類非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系 H46

2、0細(xì)胞中，通過轉(zhuǎn)染微小 RNA-221和微小RNA-222的模擬物以及抑制物模擬其在H460細(xì)胞中表達(dá)上調(diào)和下調(diào)以及之后進行的臨床非小細(xì)胞肺癌患者癌組織及癌旁組織中微小RNA-221表達(dá)水平的研究，揭示miR-221和miR-222在調(diào)控人類非小細(xì)胞肺癌中的作用和潛在的分子機制。
　　本研究中通過體外轉(zhuǎn)染miR-221和miR-222模擬物（mimics）以及miR-221和miR-222抑制物（inhibitors），使miR-

3、221和miR-222在人類非小細(xì)胞肺癌H460細(xì)胞中的表升高（mimics組）或者降低（inhibitors組），并通過CCK-8以及EdU染色檢測細(xì)胞活力及增殖情況的改變；通過生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫預(yù)測miR-221和miR-222的潛在靶基因，并檢測miR-221/222模擬物及抑制物對其潛在靶基因蛋白水平表達(dá)的影響，從而初步揭示miR-221和miR-222在人類非小細(xì)胞肺癌H460細(xì)胞中的潛在靶基因；應(yīng)用實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反

4、應(yīng)（RT-PCR）Taqman MGB探針法檢測40例非小細(xì)胞肺癌患者癌組織及癌旁組織中 miR-221的表達(dá)水平，以看家基因U6snRNA為內(nèi)參，進行熒光定量PCR檢測，統(tǒng)計分析表達(dá)水平的差異；通過蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測p27蛋白在臨床非小細(xì)胞肺癌癌組織及癌旁組織中的表達(dá)差異。
　　以上實驗結(jié)果表明，與對照組相比，在H460細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-221和miR-222模擬物48h后，其細(xì)胞活力和增殖能力均顯著

5、增加，同時H460細(xì)胞內(nèi)p27在蛋白水平的表達(dá)顯著降低。相反地，和對照組相比，在H460細(xì)胞中轉(zhuǎn)染miR-221和miR-222抑制物48h后，H460細(xì)胞活力及增殖能力均顯著降低，同時H460細(xì)胞內(nèi)p27的蛋白水平的表達(dá)顯著增加。組織水平上，miR221在非小細(xì)胞肺癌癌組織的表達(dá)水平較癌旁組織高且具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.0001）。不同臨床病例特征組間 miRNA-221表達(dá)水平女性（31.55±17.74）比男性（11.34±8.3

6、9）高，無吸煙史（25.76±17.73）比有吸煙史者（10.81±8.09）高，腺癌（20.54±15.71）比鱗癌（7.402±7.85）高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），與患者影像學(xué)分型、腫瘤大小、淋巴轉(zhuǎn)移、組織學(xué)類型無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。p27在臨床非小細(xì)胞肺癌癌組織中的蛋白表達(dá)水平較對照組顯著下調(diào)（P＜0.05）。
　　通過本研究我們得出以下結(jié)論： miR-221和miR-222可促進人類非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞系H