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1、目的:血管新生與惡性血液病的發(fā)生發(fā)展有密切的關(guān)系。VEGF和COX-2是血管新生的重要因子,也與惡性血液病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究重點(diǎn)探討VEGF和COX-2mRNA在惡性血液病患者中表達(dá)的相關(guān)性以及COX-2抑制劑對(duì)VEGF和COX-2蛋白表達(dá)水平的影響。 方法:采集96例成人惡性血液病患者和20例正常對(duì)照的骨髓及外周血單個(gè)核細(xì)胞,應(yīng)用實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測(cè)VEGF、COX-2的mRNA水平,并按疾病類型分組分析其臨床意義。應(yīng)
2、用流式細(xì)胞術(shù)(FCM)檢測(cè)不同濃度COX-2抑制劑干預(yù)U937細(xì)胞株前后不同時(shí)間點(diǎn)VEGF和COX-2蛋白的表達(dá)水平。 結(jié)果: 1.各組中VEGF mRNA表達(dá)的情況VEGF在急性白血病(AL)中的表達(dá):AL患者VEGFmRNA表達(dá)水平為0.67±0.23,高于正常表達(dá)水平0.12±0.21,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);其中初治急性髓系白血病(AML)患者VEGF表達(dá)水平為0.77±0.27,與正常對(duì)照比較,差異有
3、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),M2、M4和M5組表達(dá)水平分別為0.68±0.16、0.79±0.32和0.75±0.25,M3表達(dá)水平為0.76±0.21。ALL患者VEGF表達(dá)水平為0.22±0.61,與正常對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。復(fù)發(fā)組AL患者VEGF表達(dá)水平為0.71±0.25,與正常對(duì)照比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),緩解組AL患者VEGF表達(dá)水平為0.22±0.63,與正常對(duì)照比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
4、(P>0.05),初治組AL與復(fù)發(fā)組AL無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 38例初治AL患者經(jīng)治療后緩解率為81.6%(31/38)。按照VEGF mRNA平均表達(dá)水平0.67±0.23將38例初治AL患者分為兩組。VEGF mRNA低于平均表達(dá)水平的初治AL患者緩解率為95.4%(21/22);VEGF mRNA高于平均表達(dá)水平的初治AL患者緩解率為43.7%(7/16)。兩組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。按照COX-2 mR
5、NA平均表達(dá)水平0.72±0.61將38例初治AL患者分為兩組。COX-2 mRNA低于平均表達(dá)水平的初治AL患者緩解率為92%(23/25);COX-2 mRNA高于平均表達(dá)水平的初治AL患者緩解率為41.7%(5/12)。兩組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。共同表達(dá)VEGF mRNA和COX-2 mRNA的初治AL患者緩解率為26.3%(5/19)。 VEGF mRNA在多發(fā)性骨髓瘤中表達(dá)情況:初治多發(fā)性骨髓瘤(MM
6、)患者VEGF mRNA表達(dá)水平為0.84±0.11,與正常對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。緩解MM患者VEGF表達(dá)水平為0.77±0.09,與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。初治組與緩解組相比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。 VEGF mRNA在高危骨髓增生異常綜和征(MDS)中表達(dá)情況:高危MDS患者VEGF表達(dá)水平為0.49±0.54,與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。高危M
7、DS患者與初治AL比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。 VEGF mRNA在各期慢性粒細(xì)胞白血病(CML)中表達(dá)情況:慢性期CML患者VEGF表達(dá)水平為0.43±0.42,與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)急變期患者VEGF表達(dá)水平為0.66±0.31,與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。慢性期CML患者與急變期CML患者比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。急變期CML患者與初治AL比較,差異
8、無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05) 2.各組中COX-2 mRNA表達(dá)的情況AL患者COX-2 mRNA表達(dá)水平為0.72±0.61,高于正常表達(dá)水平0.24±0.34,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);其中初治AML患者COX-2表達(dá)水平為0.77±0.37,與正常對(duì)照比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),M4和M5組表達(dá)水平分別為0.80±0.22和0.74±0.62,M2和M3組表達(dá)水平分別為0.72±0.45和0.79±0.32。A
9、LL患者COX-2表達(dá)水平為0.68±0.41,與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。復(fù)發(fā)組AL患者COX-2表達(dá)水平為0.76±0.59,與正常對(duì)照比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),緩解組AL患者COX-2表達(dá)水平為0.31±0.24,與正常對(duì)照比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),初治組AL與復(fù)發(fā)組AL比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。 COX-2 mRNA在MM中表達(dá)情況:初治MM患者COX-2表達(dá)水
10、平為0.67±0.72,與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);緩解MM患者COX-2表達(dá)水平為0.45±0.32,與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 COX-2 mRNA在高危MDS中表達(dá)情況:高危MDS患者COX-2表達(dá)水平為0.73±0.52,與正常對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。高危MDS患者COX-2 mRNA與初治AL比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。慢性期CML患者
11、COX-2表達(dá)水平為0.55±0.57,與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。急變患者COX-2表達(dá)水平為0.81±0.12,與正常對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。慢性期CML患者與急變期CML患者比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。急變期CML患者與初治AL比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)3.各組中VEGF和COX-2 mRNA表達(dá)的相關(guān)性AL組中有10例M3,其中9例表達(dá)VEGF、7例表達(dá)COX-2
12、,在共同表達(dá)兩基因的6例中,VEGF mRNA表達(dá)與COX-2 mRNA表達(dá)呈正相關(guān)。M4 7例,其中6例表達(dá)VEGF、6例表達(dá)COX-2,在共同表達(dá)兩基因的6例中,VEGF mRNA的表達(dá)與COX-2 mRNA表達(dá)呈正相關(guān)。M5 5例,其中5例表達(dá)VEGF、5例表達(dá)COX-2,在共同表達(dá)兩基因的4例中,VEGF mRNA的表達(dá)與COX-2 mRNA表達(dá)呈正相關(guān)。 8例MM患者中,5例表達(dá)VEGF,7例表達(dá)COX-2,在共同表達(dá)
13、兩基因的3例中,VEGF mRNA的表達(dá)與COX-2mRNA表達(dá)無(wú)相關(guān)性。 8例高危MDS患者中,7例表達(dá)VEGF、3例表達(dá)COX-2,在共同表達(dá)兩基因的3例中,VEGF mRNA的表達(dá)與COX-2mRNA表達(dá)無(wú)相關(guān)性。 10例慢性期CML中9例表達(dá)VEGF、5例表達(dá)COX-2,在共同表達(dá)兩基因的5例中,VEGF mRNA的表達(dá)與COX-2mRNA表達(dá)呈正相關(guān)。 4.應(yīng)用COX-2抑制劑Ⅲ對(duì)U937細(xì)胞株進(jìn)行干預(yù)
14、的結(jié)果空白組COX-2的表達(dá)率為99.2±0.5%。給藥6小時(shí)后,5umol/l組COX-2的表達(dá)率為94.7±7.22%;10u mol/l組COX-2的表達(dá)率為81.5±7.13%;50u mol/l組COX-2的表達(dá)率為71.7±6.28%。與空白對(duì)照組相比,10u mol/l組以及50u mol/l組COX-2表達(dá)降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)??瞻捉MVEGF表達(dá)率為99.6±0.4%;5u mol/l組VEGF表達(dá)率
15、為97.5±5.2%;10u mol/l組VEGF的表達(dá)率為96.7±2.47%;50u mol/l組VEGF的表達(dá)率為83.5±7.23%。與空白對(duì)照組相比,50u mol/l組VEGF表達(dá)下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。給藥12小時(shí)后,5u mol/l組COX-2的表達(dá)率為89.4±5.22%;10u mol/l組COX-2的表達(dá)率為74.7±2.55%;50u mol/l組COX-2的表達(dá)率為67.8±5.32%。與空白
16、對(duì)照組相比,5u mol/l組、10u mol/l組以及50u mol/l組COX-2表達(dá)下降,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5umol/l組VEGF表達(dá)率為92.4±4.51%;10u mol/l組VEGF表達(dá)率為80.2±3.82%;50u mol/l組VEGF表達(dá)率為66.7±1.91%。與空白對(duì)照組相比,10u mol/l和50u mol/l組VEGF表達(dá)下降,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 給藥24小時(shí)后
17、,5u mol/l組COX-2表達(dá)率為77.5±2.85%;10u mold組COX-2表達(dá)率為58.4±7.25%;50u mol/l組COX-2表達(dá)率為43.5±2.38%。與空白對(duì)照組相比,5u mol/l組、10u mol/l組以及50u mol/l組COX-2表達(dá)下降,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5u mol/l組VEGF表達(dá)率為90.2±6.87%;10u mol/l組VEGF表達(dá)率為72.9±5.81%;50u
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