大鼠肝門阻斷過程中捫摸對肝臟熱缺血再灌注損傷的影響及機制研究.pdf

1、目的：
　　 探討在肝臟外科手術過程當中，手術操作本身即捫摸對大鼠在體肝臟熱缺血再灌注損傷的影響及意義;探討捫摸影響肝臟熱缺血再灌注損傷可能的機制。
　　 方法：
　　 1.模型制作:
　　 將30只清潔級(SPF)雄性SD大鼠(Sprague-Dawleyrat)隨機分成三組:假手術組（Sham組）、肝臟缺血再灌注組（IR組）、捫摸組（MN組），每組10只。Sham組僅行剖腹、肝鐮狀韌帶游離、肝十二指腸

2、韌帶暴露，不行任何其他手法操作;IR組開腹后充分暴露肝門，解剖并分離供應肝中葉和右葉的動脈、靜脈和膽管，并使用無創(chuàng)動脈夾阻斷15min，再灌注2h;MN組操作同IR組，且在肝門阻斷過程中對大鼠肝臟右葉進行輕柔擠壓及摩擦2min×5次，每次手法操作間隔1min，操作力度相同、適中，避免對肝葉造成機械性損傷。
　　 2.觀測指標:
　　 血清轉氨酶水平改變:各組大白鼠在再灌注2h后分別取門靜脈血進行血清轉氨酶ALT及AST定

3、量檢測（u/l）。
　　 肝組織病理學檢查:取肝組織行H-E染色觀察肝組織損傷情況并行損傷分級評分，評分標準:0分:靜脈血管及肝小葉內無炎性細胞浸潤及肝細胞變性、壞死;1分:匯管區(qū)少量炎細胞浸潤，肝細胞少量變性及壞死;2分:肝小葉內散在肝細胞變性及灶狀壞死，肝組織內較多炎性細胞浸潤，肝小葉結構尚完整;3分:肝竇、肝中央靜脈內淤血，廣泛肝細胞變性、壞死，肝組織大量炎性細胞浸潤，部分肝小葉破壞。每個標本隨機取5個視野損傷評分平均值作

4、為每個標本評分值。
　　 肝組織腫瘤壞死因子-α(Tumornecrosisfactor-α，TNF-α)和P-選擇素(P-selectin)表達水平測定:使用免疫組化法（Sp法）測量肝組織TNF-α和P-選擇素表達水平，結果用平均陽性灰度值表達。
　　 所有定量資料以均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，統(tǒng)計學分析采用單因素方差分析LSD法。SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理，P＜0.05為有統(tǒng)計學意義。
　　 結

5、果：
　　 1.血清肝臟轉氨酶水平測定結果:
　　 IR組血清ALT水平（251.87±50.80U/L）和MN組血清ALT水平（366.75±89.45U/L）較Sham組（57.25±16.05U/L）明顯升高(P=0.000＜0.05，F(xiàn)=54.19)，其中MN組較IR組ALT水平明顯增高(P=0.000＜0.05);IR組血清AST水平（226.75±19.12U/L）和MN組血清AST水平（792.25±87.

6、71U/L）較Sham組（76.50±12.38U/L）明顯升高(P=0.000＜0.05，F(xiàn)=416.21);上述測量指標MN組較IR組均明顯增高(P=0.000＜0.05)。
　　 2.光鏡下肝組織病理改變及損傷評分結果:
　　 Sham組肝組織光鏡下觀察可見肝小葉、肝竇及肝細胞索結構均正常，未見有明顯的肝細胞變性及壞死，匯管區(qū)內未見有明顯炎癥細胞浸潤;IR組肝組織光鏡下可見匯管區(qū)及肝竇內有少量炎癥細胞浸潤，部分肝細

7、胞索結構破壞，肝小葉內散在肝細胞變性及壞死，肝小葉結構尚正常;MN組觀察見肝組織內肝竇及匯管區(qū)嚴重瘀血，同時有大量的炎性細胞浸潤，肝細胞索結構紊亂，肝小葉內可見大量肝細胞變性及肝細胞壞死。評分結果:IR組肝組織病理評分（0.93±0.13）和MN組肝組織病例評分（2.10±0.15）分別比Sham組（0.15±0.12）高(P=0.001＜0.05)，而MN組較IR組肝組織病理評分明顯增高(P=0.000＜0.05)。
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8、.肝組織TNF-α和P-選擇素表達情況:
　　 TNF-α和P-選擇素在三組中的表達有明顯的統(tǒng)計學差異(P＜0.05):其中IR組肝組織TNF-α表達的平均陽性灰度值水平（132.08±4.84）和MN組TNF-α平均陽性灰度值（150.50±12.11）較Sham組（85.52±6.31）明顯升高(P=0.000＜0.05，F(xiàn)=128.19);IR組肝組織P-選擇素表達的平均陽性灰度值水平（142.14±3.60）和MN組P-

9、選擇素平均陽性灰度值（151.91±2.36）較Sham組（91.05±2.66）明顯升高(P=0.000＜0.05，F(xiàn)=1000.39)，上述兩指標在MN組中表達水平較IR組均明顯增高，差異有統(tǒng)計學意義(p=0.000＜0.05)。
　　 結論：
　　 1.捫摸可加重大鼠在體肝臟熱缺血再灌注損傷，因此在肝臟外科手術操作過程當中應盡量減少對其進行捫摸。
　　 2.捫摸加重肝臟熱缺血再灌注損傷的機制可能由于捫摸引起