酶法降解黃原膠制備寡糖工藝初步研究.pdf

1、寡糖因其獨特的結(jié)構(gòu)而成為重要的生命物質(zhì)，隨著分子生物學(xué)和細(xì)胞生物學(xué)的快速發(fā)展，寡糖的生物學(xué)活性和功能不斷得到揭示，同時也引起人們越來越多的關(guān)注，因此寡糖將會有廣闊的應(yīng)用空間和市場前景。寡糖的制備有化學(xué)法、物理法和生物酶法。其中，酶法反應(yīng)條件溫和，選擇性較好，是理想的寡糖制備方法。本文以黃原膠為原料，采用生物酶法制備出一種新型寡糖，并對該黃原膠寡糖的生物活性進行了初步研究。主要研究內(nèi)容如下：
　　 利用實驗室分離純化出的黃原膠降解

2、菌Paenibacillus lautus XD2-8，以黃原膠為底物搖瓶培養(yǎng)，通過測定發(fā)酵溫度、pH、搖瓶裝量、底物濃度、種齡對發(fā)酵液的菌體密度和相對酶活力的影響，確定該菌的最佳產(chǎn)酶條件。實驗結(jié)果表明：發(fā)酵產(chǎn)黃原膠降解酶的最佳條件為溫度30 ℃，初始pH 為7.5(滅菌前)，搖瓶裝量為80mL，底物濃度為10g/L，搖床轉(zhuǎn)速為200r/min，接種的適宜種齡為36～42h，接種量對發(fā)酵產(chǎn)酶影響不大。在黃原膠降解菌(Paenibacil

3、lus lautus)XD2-8的最佳產(chǎn)酶條件下，發(fā)酵培養(yǎng)制備黃原膠降解酶，并對其酶學(xué)特性做了初步的研究。結(jié)果顯示，該酶的最優(yōu)酶促反應(yīng)條件為：溫度為35℃、pH 值為6.0、底物濃度為5g/L；葡萄糖對該酶促反應(yīng)具有抑制作用，且葡萄糖濃度越大抑制作用越強。
　　 然后利用該黃原膠降解酶對黃原膠進行降解，通過測定溫度、pH、酶解時間、底物濃度和加酶量對制備黃原膠寡糖生物活性(羥基自由基清除率、超氧自由基清除率和DPPH 自由基清除

4、率)的影響，確定該酶制備黃原膠寡糖的最佳工藝條件。
　　 結(jié)果顯示：具有清除羥基自由基活性的黃原膠寡糖的最適制備溫度是35℃，pH 值為6.2，酶解時間是5h，底物濃度為4g/L，于80mL的黃原膠溶液中加入10ml 粗酶；
　　 具有清除超氧自由基活性的黃原膠寡糖的最適制備溫度是33 ℃，pH 值為6.0，酶解時間是5h，底物濃度為6g/L，于80mL的黃原膠溶液中加入9mL 粗酶；具有清除DPPH 自由基活性的黃原膠