體外受精對小鼠早期生長發(fā)育中印跡基因IGF2和H19mRNA表達的影響.pdf

1、目的：本研究旨在探討體外受精對小鼠早期生長發(fā)育中印跡基因IGF2和H19mRNA表達的影響，借此來研究體外受精是否對小鼠早期生長發(fā)育有影響。
　　 方法：將已經(jīng)獲能的ICR小鼠精子用移液器吸入該品系卵母細胞中，使精子的濃度為(5～7)×105個/mL(每個液滴中總卵數(shù)為50枚左右)，放人37℃、5％CO2培養(yǎng)箱受精6h，將受精卵繼續(xù)培養(yǎng)18～22h，并將發(fā)育良好的2細胞胚胎移植至同期發(fā)情的假孕母鼠輸卵管內(nèi)；并設(shè)自然交配小鼠作為正

2、常對照。以見陰栓視為受孕1d，體外受精組和自然交配對照組小鼠妊娠14d，取胚胎，稱重，然后迅速用液氮將其冷凍；其余體外受精組和對照組已孕雌鼠，讓其繼續(xù)懷孕直至仔鼠出生，稱取子代初生重，然后將新生仔鼠解剖，取其心、肝、腦，并將它們迅速用液氮冷凍。將已經(jīng)用液氮冷凍過的14天胚胎和從仔鼠上采集的心、肝、腦樣品按照RNeasyMini Kit的操作規(guī)程提取總RNA，測其濃度后將RNA反轉(zhuǎn)錄成DNA，用Real-timeRT-PCR檢測IGF2和

3、H19 mRNA在實驗組和對照組胚胎和初生鼠中的表達。
　　 結(jié)果：實驗發(fā)現(xiàn)：體外受精組第14天胚胎IGF2/H19的mRNA的表達量分別是對照組的1.57倍和1.38倍，第14天胚胎重，體外受精組比對照組高16.5％，協(xié)方差檢驗差異極顯著(P<0.001)；體外受精組初生小鼠心臟IGF2/H19的mRNA的表達量分別是對照組的1.87倍和2.06倍：體外受精組初生小鼠肝臟IGF2/H19的mRNA的表達量分別是對照組的1.56