版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領
文檔簡介
1、目的:
研究人肥大細胞系(HMC-1)機械敏感性離子通道的電學特性;建立適用于膜片鉗記錄的外周組織片模型,并進一步對其中原位肥大細胞(mast cell,MC)的機械敏感性進行驗證。
方法:
(1)在光鏡顯微鏡下觀察低滲環(huán)境導致HMC-1細胞處于高應力狀態(tài)中對該細胞脫顆粒的影響。
(2)利用熒光成像技術,以鈣綠(Calcium Green-1 AM)為熒光指示劑,測量低滲環(huán)境中HM
2、C-1胞內(nèi)Ca2+濃度I)的變化。
(3)在膜片鉗外面朝外(outside-out)和細胞吸附(cell-attached)兩種模式下,通過膜片鉗記錄電極對細胞膜施加正壓(+30~+60cmH2O)或負壓(-60~-30cmH2O)刺激,測量和分析HMC-1上張力激活性(stretch-activated,SA)離子通道的單通道特性。
(4)制備大鼠“后三里”穴區(qū)(ST36)皮下結(jié)締組織片,用甲苯胺藍(Tol
3、uidine blue,TB)或中興紅(Neutral red,NR)染色觀察組織片內(nèi)MCs的分布,并用膜片鉗全細胞(whole-cell)模式對組織片內(nèi)原位MCs的SA電流進行記錄。
結(jié)果:
(1)在230mOsm/kg的低滲細胞外液中,處于穩(wěn)定狀態(tài)的HMC-1細胞會在5~30分鐘內(nèi)出現(xiàn)脫顆粒現(xiàn)象,脫顆粒率為54.9±8.5%(n=4個獨立實驗,P≤0.01)(mean±SEM)。低滲環(huán)境導致HMC-1脫顆
4、粒效應可被C1-通道阻斷劑DIDS和香草精受體TRPV2阻斷劑SKF96365抑制,脫顆粒率分別下降到17.7±5.4%(n=4個獨立實驗,P≤0.05)和22.2±7.9%(n=2個獨立實驗)。
(2)250mOsm/kg的低滲細胞外液能增加HMC-1胞內(nèi)相對鈣熒光強度,熒光強度從對照組的100%上升到116.7±3.6%(n=52,5個獨立實驗,P≤0.01)。TRPV蛋白阻斷劑釘紅(ruthenium red,RuR
5、)、SKF96365和DIDS能取消或抑制該增強效應,胞內(nèi)相對鈣熒光強度分別下降到100.3±0.9%(n=41,3個獨立實驗,P≥0.01)、103.7±3.2%(n=30,3個獨立實驗,P≤0.05)和67.8±5.2%(n=29,4個獨立實驗,P≤0.01)。
(3)在膜片鉗實驗中,直接的壓力牽張可激活HMC-1細胞SA通道。SA單通道電流表現(xiàn)出較強的外向整流性。+100mV膜電位下的通道電導為55.1±3.4pS(
6、n=38)。SA通道的開放概率(open probability,Po)具有電壓依賴性,在正膜電位下急劇增大;并且具有壓力依賴性,Po隨著外界壓力的增加而增大,在+20mV膜電位下,達到最大Po值一半所需的壓力為26.4cmH2O。在+60mV膜電位下,通道開放時間分布(open-time distribution)能被3個指數(shù)函數(shù)擬合,時間常數(shù)分別為τ1o=755.1ms、τ2o=166.4ms和τ3o=16.5ms;通道關閉時間分布
7、(closed-time distribution)也能被3個指數(shù)函數(shù)擬合,時間常數(shù)分別為τ1c=661.6ms、τ2c=253.2ms和T3c=5.6ms。
(4)HMC-1細胞的SA單通道活動具有細胞外Cl-濃度([Cl-]。)依賴性(n=9)。當[Cl-]。由169mM降低到19mM后,+100mV膜電位下的電導從44.2±4.4pS下降到15.1±1.6pS(P≤50.01)。在+60mV膜電位下,Po降低到對照組
8、的62.2±13.6%(P≤0.01)。V1/2從5.5±2.7mV上升到45.6±6.9mV。
(5)HMC-1細胞SA單通道活動可被Cl-通道阻斷劑DIDS可逆性抑制(n=9)。+100mV膜電位下的電導從58.5±4.1pS下降到18.9±7.0pS(P≤0.01)。+60mV膜電位下,Po降低到對照組的20.6±1.4%(P≤0.01)。
(6)用細胞松弛素B(cytochalasin B,CB)斷裂
9、細胞骨架后發(fā)現(xiàn),激活SA通道所需的壓力降低。
(7)大量MCs分布在大鼠“后三里”穴區(qū)(ST36)的皮下結(jié)締組織片內(nèi)。和HMC-1類似,大鼠原位MCs也同樣表達機械敏感性離子通道。SA通道的全細胞電流表現(xiàn)出外向整流性,并隨外界壓力的增加而增大。+100mV膜電位下,由-60cmH2O激活的SA通道的電導為83.2±25.5pS,翻轉(zhuǎn)電位約為.35.8mV。
結(jié)論:
HMC-1脫顆粒效應可被機械刺
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 機械敏感性離子通道在骨科領域的研究
- 遠端創(chuàng)傷和缺血對心肌細胞膜ATP敏感性鉀離子通道表達的影響.pdf
- 酸敏感性離子通道(ASICs)影響食管酸敏感性的機制研究.pdf
- 心肌細胞機械敏感性陰離子通道及信號轉(zhuǎn)導機制的研究.pdf
- 肥大細胞與肝癌——影響肝癌周圍肥大細胞數(shù)量相關因素研究.pdf
- 稻瘟病菌機械敏感性離子通道的鑒定和功能分析.pdf
- 機械敏感性離子通道Piezo在正畸牙周組織中表達和功能的研究.pdf
- 細胞、肥大細胞活化機制的研究.pdf
- 人神經(jīng)母細胞瘤NB-1的細胞膜離子通道的實驗研究.pdf
- 雞胚肥大細胞的發(fā)育研究.pdf
- 蛋白酶激活受體4在肥大細胞介導的內(nèi)臟高敏感性疼痛的作用和調(diào)節(jié)機制的研究.pdf
- 右美托咪定對大鼠心室肌細胞膜ATP敏感性鉀通道電流的影響.pdf
- 突觸噪聲作用下神經(jīng)元細胞膜離子通道的溫度效應.pdf
- 24405.大鼠皮層神經(jīng)細胞膜離子通道電流測量與重構(gòu)
- 肥大細胞與硬皮病關系的研究.pdf
- 人肺腺癌A-549細胞膜鉀離子通道特性與細胞增殖關系的研究.pdf
- 肥大細胞吸收角叉菜膠
- 鹽酸關附甲素對豚鼠、大鼠心室肌細胞膜離子通道的影響.pdf
- 人胃潰瘍肥大細胞、巨噬細胞的反應.pdf
- ATP敏感性鉀離子通道在骨癌痛大鼠痛覺超敏中的作用.pdf
評論
0/150
提交評論