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文檔簡介
1、目的:研究發(fā)育與衰老相關(guān)疾病基因APP,BACE2在非洲爪蛙早期胚胎時空表達(dá)
材料和方法:分子克隆構(gòu)建質(zhì)粒,胚胎原位雜交,RT-PCR定量分析,細(xì)胞培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染,蛋白表達(dá)檢測,胚胎組織切片免疫熒光檢測。
結(jié)果:成功構(gòu)建爪蛙APP,BACE2質(zhì)??寺〔⑥D(zhuǎn)染細(xì)胞檢測表達(dá)通過原位雜交和免疫熒光檢測早期胚胎中APP和BACE2的表達(dá)圖示并對APP進(jìn)行了功能結(jié)構(gòu)域分析,驗(yàn)證了BACE2基因水解Aβ的作用,進(jìn)一步研究了RCAN1基
2、因可能與APP的相互作用。
結(jié)論:我們描述了APP和BACE2基因在爪蟾發(fā)育過程并比較了其在眼睛和大腦早期的時空表達(dá)圖式。氨基酸序列的比對分析顯示具有高度的保守。RT-PCR分析表明,Xl.bace2和Xl.rcan1轉(zhuǎn)錄可以明顯檢測到從囊胚階段到原腸胚后期階段,其表達(dá)仍維持在較高水平,直到神經(jīng)胚階段??梢栽趕tage30,40期和45期檢測到這些基因的高表達(dá)。結(jié)果表明,在發(fā)育過程中,這些基因表達(dá)的檢測主要是內(nèi)源性蛋白表達(dá)。與
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