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文檔簡介
1、目的:
在前期實驗基礎上利用藥物阻斷劑、免疫熒光染色、TaqManQPCR、激光共聚焦等技術進一步研究腸道病毒71型入侵人神經(jīng)母細胞瘤SK-N-SH細胞的機制,尤其是網(wǎng)格蛋白依賴型內(nèi)吞途徑在EV71進入人SK-N-SH細胞中作用。
材料和方法:
EV71病毒和所有的細胞株來源于重慶醫(yī)科大學附屬兒童醫(yī)院兒研所組織庫,均為前期實驗研究所保存。實驗分組一:
(1)氯丙嗪(CPZ)處理組(10、20 uM
2、 CPZ)。
?。?)制霉菌素(NT)處理組(10、20 ug/ml NT)。
(3)未處理組(無任何藥物)。每組含3個平行孔,并重復3次。SK-N-SH細胞按上述實驗分組給予不同的處理條件后,再進行EV71感染實驗,最后利用 TaqManQPCR和免疫熒光染色法檢測靶細胞中EV71 mRNA和 VP1蛋白表達水平的變化。
實驗分組二:
?。?)CPZ處理組(10、20 uM CPZ)。
(
3、2)未處理組(無任何藥物)。
每組含3個平行孔,并重復3次。SK-N-SH細胞按上述實驗分組給予不同的處理條件后,再進行EV71感染實驗,最后利用激光共聚焦顯微鏡術檢測EV71與入侵途徑標志分子共定位。
結果:
1、TaqManQPCR結果顯示CPZ能夠抑制EV71 mRNA的表達(P<0.05),而制霉菌素對其影響無意義(P>0.05)。
2、免疫熒光染色結果顯示CPZ能夠抑制EV71 VP1蛋
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