白細胞介素4及其受體生物傳感體系的構(gòu)建及藥物活性評價應(yīng)用.pdf

1、壓電生物傳感器作為一種新型的分析手段，因其較低的檢測下限、簡單的操作步驟、低廉的成本等優(yōu)勢，已被廣泛應(yīng)用在了臨床、環(huán)境、食品等領(lǐng)域。其表面敏感膜的制備，是壓電生物傳感器構(gòu)建的關(guān)鍵步驟。本文致力于白細胞介素4-白細胞介素4受體(IL-4-sIL-4R)的生物傳感體系的構(gòu)建，并將其應(yīng)用于藥物活性評價中。主要內(nèi)容如下：
　　 (1)利用石英晶體微天平(QCM)構(gòu)建了兩種基于白細胞介素4-白細胞介素4受體的生物傳感體系，實現(xiàn)了對sIL-

2、4R與IL-4特異性結(jié)合反應(yīng)的實時監(jiān)控。
　　 利用α-硫辛酸自組裝膜技術(shù)將sIL-4R固定在石英晶體金電極的表面，構(gòu)建了基于sIL-4R的親和型生物傳感活性界面。實驗結(jié)果表明：此方法能夠較為有效地將sIL-4R固定在金表面，固定的sIL-4R可以和IL-4發(fā)生特異性、濃度依賴性的結(jié)合反應(yīng)。10mg·L-1是sIL-4R的最佳固定濃度，其固定量可達112.46ng，加入10mgL-1的IL-4后可引起62.96ng的質(zhì)量變化，R

3、SD分別為3.90％和4.86%，說明實驗可信度較好。本文同時利用QCM實時監(jiān)測了sIL-4R與IL-4之間的特異性作用過程，并對其進行動力學(xué)分析，得到其解離平衡常數(shù)KD為1.42×10-8M。
　　 利用生物素-親和素的強結(jié)合作用，將生物素衍生化的sIL-4R固定于石英晶體金電極表面，構(gòu)建了基于sIL-4R的親和型生物傳感活性界面。實驗結(jié)果表明：此方法能更有效的將sIL-4R固定在金表面，固定的sIL-4R可與IL-4發(fā)生特異

4、性的、濃度依賴型的結(jié)合反應(yīng)。15mg·L-1是sIL-4R的最佳固定濃度，其固定量可達147.19ng，加入10mg·L-1的IL-4后可引起97.11ng的質(zhì)量變化，RSD分別為4.98%和4.25%，說明實驗可信度較好。利用QCM實時監(jiān)測其反應(yīng)過程，得到解離平衡常數(shù)KD為1.38×10-8M。
　　 (2)將白細胞介素4-白細胞介素4受體生物傳感體系應(yīng)用在藥物活性評價中，并初步驗證了此方法在藥物活性評價中的可行性。
　

5、　 本文分別對兩種生物傳感體系進行了對比，并對sIL-4R拮抗劑進行拮抗活性研究，發(fā)現(xiàn)兩種生物傳感體系均能夠較好的評價其藥物活性，并得出4'，7-二甲氧基異黃酮的拮抗率為30%左右，而硫藤黃菌素拮抗活性為5%。
　　 對傳感器敏感表面的再生及使用壽命進行的研究表明IL-4結(jié)合至表面后可用0.08M的尿素洗脫其與sIL-4R的結(jié)合，再生得到sIL-4R包被的樣品池表面，重復(fù)再生6次以內(nèi)的界面其結(jié)合活性能保持90%以上。且金基片表