Bcl-2和c-kit蛋白在人薄子宮內膜增殖晚期的表達及相關性研究.pdf

1、背景及意義：
　　 輔助生育技術中(ART)與妊娠率密切相關的兩個因素是胚胎質量和子宮內膜容受性。近年來ART技術飛速發(fā)展，胚胎實驗室技術不斷改進，卵子受精率及優(yōu)質胚胎率均得到很大提高，但體外受精-胚胎移植(IVF-ET)的成功率仍徘徊在40～50％左右。因此，越來越多的學者開始關注如何提高子宮內膜容受性的問題。臨床研究表明，子宮內膜厚度與胚胎著床率具有顯著相關性。子宮內膜厚度可以反映子宮內膜的功能狀態(tài)，預測子宮內膜的容受性。一

2、定厚度的子宮內膜是胚胎植入的必要條件，是決定生育的重要因素。目前，薄子宮內膜尚無明確診斷標準，但多數(shù)文獻將黃體中期子宮內膜厚度＜7mm者稱為薄子宮內膜。在IVF周期中薄子宮內膜患者較為常見，但其胚胎著床率較低，因此被認為是胚胎著床失敗的關鍵因素之一。薄子宮內膜在IVF周期中意味著被迫冷凍胚胎和反復取消周期的概率增加，給患者帶來了巨大的心理壓力及經濟負擔。
　　 細胞增殖發(fā)育需要充足的養(yǎng)分，因此子宮內膜下豐富的血液供應是子宮內膜生

3、長的重要條件。臨床上治療薄子宮內膜除了給予雌激素促進內膜增生外，還給予小劑量阿司匹林、枸櫞酸西地那非等藥物，通過改善局部血液灌注來增加子宮內膜厚度，但是治療效果不佳，甚至有些患者對藥物治療無反應。并且這些藥物在使用的同時還帶來一些副作用。因此，對薄子宮內膜的治療存在較多爭議，甚至有學者不建議使用這些藥物。而有的臨床研究認為在IVF周期中子宮內膜厚度改變與雌激素濃度增高無關，且不同厚度內膜下血流可能并無差異。這些研究提示除雌激素及血流影響

4、以外還存在有其它影響子宮內膜細胞增殖發(fā)育的因素。
　　 有學者通過電鏡觀察發(fā)現(xiàn)子宮內膜中存在有凋亡，并且發(fā)現(xiàn)凋亡小體的出現(xiàn)與子宮內膜周期性變化一致，提出凋亡調控子宮內膜周期性改變的觀點。子宮內膜細胞增殖與凋亡失衡可能導致疾病的發(fā)生。凋亡相關因子中Bcl-2和c-kit與卵巢激素水平相關，在子宮內膜細胞增殖、凋亡過程中起到重要作用。而這些因子同時也是子宮內膜干細胞的標志物，一定程度上可以反映子宮內膜干細胞的增殖能力。這些研究為探討

5、薄子宮內膜的發(fā)病機制及臨床治療提出了新的理論指導。但目前尚無從細胞增殖與凋亡的角度來研究薄子宮內膜的報道。
　　 本實驗通過研究鄭州大學第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心薄子宮內膜（內膜厚度＜7mm）患者增殖晚期子宮內膜中Bcl-2和c-kit的表達及相關性，為研究提高子宮內膜厚度，以改善子宮內膜容受性及輔助生殖技術妊娠率提供理論依據(jù)。
　　 目的：
　　 通過檢測Bcl-2和c-kit在人薄子宮內膜增殖晚期的定位與表達，

6、闡釋薄子宮內膜中Bcl-2和c-kit表達及相關性，為研究薄子宮內膜的病因，提高子宮內膜厚度，改善子宮內膜容受性及輔助生殖技術妊娠率提供理論依據(jù)。
　　 材料與方法：
　　 于2012年9月至2013年1月在鄭州大學第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心就診并準備接受輔助生育技術的不孕癥患者40例。根據(jù)子宮內膜厚度將患者分為兩組:正常厚度子宮內膜組（內膜厚度＞8mm，＜14mm，n=20），薄子宮內膜組（內膜厚度＜7mm，n=20），

7、所有患者月經周期正常（28-35天），近三個月無甾體類激素使用史，宮腔鏡檢查正常，于增殖晚期（月經周期第11-12天）取子宮內膜組織，生理鹽水沖洗后取部分投入95％酒精固定后送常規(guī)病理檢查，剩余組織分為兩份，一份做石蠟切片，HE染色，免疫組化法測定Bcl-2和c-kit的表達，一部分行Westernblot進行定量分析。采用SPSS12.0統(tǒng)計學軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果：
　　 1.Bcl-2陽性細胞呈

8、棕褐色均質狀，在增殖晚期子宮內膜腺細胞及間質細胞中表達，以腺細胞為主，位于細胞漿內。免疫組化及Western blot結果均顯示在正常子宮內膜和薄子宮內膜中均檢測到Bcl-2，但實驗組Bel-2在子宮內膜的相對表達量顯著低于對照組。差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 2.c-kit陽性細胞呈棕褐色或棕黃色，在子宮內膜的腺細胞胞膜和胞漿中表達，以胞膜為主，胞漿中少量表達，子宮內膜間質細胞中偶見點狀表達。免疫組化及Wester

9、n blot結果均顯示在正常子宮內膜和薄子宮內膜中均檢測到c-kit，但實驗組c-kit在子宮內膜的表達顯著低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　 3.薄子宮內膜組及正常子宮內膜組中Bcl-2與c-kit表達存在正相關關系(分別r=0.883,P=0.000;r=0.906,P=0.000)
　　 結論：
　　 1.薄子宮內膜組中Bcl-2表達顯著下降，說明薄子宮內膜組子宮內膜細胞凋亡抑制能力下降，