MSCT評價小型豬終末期肝病肝功能儲備實驗研究.pdf

1、研究目的：建立小型豬終末期肝病實驗?zāi)Ｐ?，采?6層螺旋CT研究終末期肝病肝臟的體積、密度、門脈壓力以及血流動力學(xué)的變化規(guī)律，并與肝組織病理、血液生化指標(biāo)及吲哚氰綠R15ICG變化對照分析，獲得小型豬終末期肝病功能儲備最佳的形態(tài)學(xué)和功能學(xué)評價指標(biāo)，建立小型豬門脈自由壓力與肝臟灌注指數(shù)相關(guān)性的回歸方程式。
　　 材料與方法：研究對象，選擇同種系巴馬小型豬60頭，隨機分為實驗組40頭，對照組20頭，雌雄不限，3～4月齡，體重12-15

2、kg，由廣西醫(yī)科大學(xué)動物實驗中心提供。實驗組采用復(fù)合因素法造模，每日一次，連續(xù)24周至形成終末期肝病為止；對照組正常喂養(yǎng)，與實驗組同期喂養(yǎng)。兩組動物分別在0、4、8、12、16、20、24周末按編號進(jìn)行抽血檢測肝臟、腎臟功能生化指標(biāo)，行16層螺旋CT常規(guī)及灌注掃描，吲哚氰綠排泄試驗，開腹測量門靜脈自由壓力以及取肝組織病理活檢。CT常規(guī)掃描結(jié)束后，測量肝、脾實質(zhì)的密度，計算肝脾CT值比值以及測量門靜脈主干及左右支的管徑，同時判斷有無腹水；

3、運用儀器自身攜帶的Volume功能軟件，測量肝臟的體積。所獲得灌注數(shù)據(jù)采用儀器自身攜帶的功能軟件、門脈灌注量、總肝灌注量以及肝動脈灌注指數(shù)。吲哚氰綠排泄試驗、門脈壓力測定及活檢：小豬基礎(chǔ)麻醉后移至手術(shù)臺，氣管插管給氧，開腹后游離門靜脈主干，插入21＃靜脈留置針，接壓力傳感器，連接Spacelab監(jiān)護(hù)儀測量門靜脈自由壓力；吲哚氰綠經(jīng)注射用水溶解后按公斤體重0.5mgICG/kg的溶液經(jīng)一側(cè)耳背靜脈30s內(nèi)注入并開始計時，分別在注射前及注射

4、后5、10、15分鐘從另一側(cè)耳背靜脈抽取血3ml，離心后取血漿，用紫外-可見光分光光度計比色，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算15分鐘潴留率(R15ICG)；然后取肝左、右葉各1cm×1cm組織，福爾馬林固定后病理送檢，術(shù)畢關(guān)腹繼續(xù)觀察喂養(yǎng)。對實驗組采用(1)病理組織標(biāo)本為肝硬化。(2)有腹水。(3)生化指標(biāo)取總膽紅素(T.BIL)＞30.9±11.9umol/L，白蛋白(ALB)＜37.96±3.96g/L，血清肌酐＞80.10±16.23umol

5、/L，凝血酶原時間(PT)＞13.21±3.43s三個標(biāo)準(zhǔn)同時具備作為終末期肝病組的納入標(biāo)準(zhǔn)。對肝臟儲備功能進(jìn)行Child-Pugh(CTP)分級和Modleofend-stageliverdiease(MELD)評分。
　　 采用SPSS15.0軟件對所得的各種數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計及分析。對實驗組和對照組以及實驗組各組間的肝臟體積、肝脾密度、肝脾密度比值、各項生化指標(biāo)、門靜脈自由壓力、灌注參數(shù)、R15ICG進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。所得結(jié)果用均

6、數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。兩組均數(shù)的比較采用兩獨立樣本的t檢驗，多組均數(shù)的比較采用單析因方差分析(One-WayANOVA)，方差不齊時應(yīng)用非參數(shù)秩和檢驗(Kruskal-Wallis檢驗)，P＜0.05有統(tǒng)計學(xué)差異；采用Logistic回歸分析的方法探討CT形態(tài)學(xué)研究指標(biāo)、CT灌注參數(shù)對終末期肝病肝功能儲備評級的影響；P＜0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。采用接受者操作特性曲線(ROC曲線)研究診斷終末期肝病的CT形態(tài)學(xué)指標(biāo)、CT灌注值的最佳臨界點

7、。
　　 結(jié)果：(1)成功制備出小型豬終末期肝病實驗?zāi)Ｐ?。其中對照組20頭無1例死亡，0至24周末肝臟組織病理表現(xiàn)正常，實驗組40頭豬24周末共死亡16頭，終末期肝病造模率為60％(24/40)；24周末獲得完整實驗數(shù)據(jù)正常組80例次，輕度肝纖維化82組例次，重度肝纖維化組62例次，終末期肝病組33例次。(2)正常組肝功能各項指標(biāo)分別為ALT(42.00±19.16)u/l，AST(27.26±9.51)u/l，ALB(37.9

8、6±3.96)g/l，GLO(19.74±9.12)g/l，A/G(1.12±0.05)，T.BIL(30.9±11.9)umol/l，Cr(80.10±16.23)umol/L，PT(13.21±3.43s)s。實驗組輕度肝纖維化至終末期肝病期肝功能各項指標(biāo)ALT、AST均表現(xiàn)為逐漸升高；ALB表現(xiàn)為逐漸下降，A/G比值倒置；T.BIL、Cr、PT均逐漸升高。實驗組ALT、AST、T.BIL、ALB、GLO、A/G、Cr、PT組間均有

9、統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。(3)正常組肝臟體積為(1166.18±181.35)cm3，實驗組輕度肝纖維化期肝臟體積較正常組稍增大，但組間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)；實驗組輕度肝纖維化至終末期肝病期肝臟體積逐漸縮小，組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)；(4)正常組肝實質(zhì)密度為(63.43±5.34)HU，實驗組從輕度肝纖維化至終末期肝病期，全肝密度呈逐漸下降的趨勢，組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。脾臟密度各組間變化不大，正常組至終

10、末期肝病組分別為(49.26±3.50，49.89±1.97，49.14±1.59，48.23±4.20)HU，組間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)。實驗組的肝/脾CT值比值均小于正常組，以終末期肝病組最低(1.01±0.10)，組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。(5)實驗組門靜脈主干隨著病變程度的加重而逐漸增大，門靜脈左右支在重度肝纖維化/早期肝硬化時期管徑最大，終末期肝病組則變小。實驗組輕度肝纖維化至終末期肝病期門靜脈自由壓(FPP)

11、逐漸升高，組間有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。(7)與正常對照組比較，實驗組的HAP先下降后增高，正常組、輕度肝纖維化組、重度肝纖維化/早期肝硬化組、終末期肝病組的平均HAP分別為(30.53±9.78，28.50±13.81，34.94±10.19，41.08±9.76)ml/(100m1.min)；PVP、TLP明顯下降，HPI呈升高趨勢，以終末期肝病組為甚；TTP逐漸延長。統(tǒng)計學(xué)分析，實驗組HAP先降后升，正常組與輕度肝纖維化組之間

12、沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，其余各組均有統(tǒng)計學(xué)差異，(P＜0.05)；實驗組PVP、TLP呈下降趨勢，各組之間均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)；實驗組HPI、TTP升高，各組之間均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。(8)從正常組到終末期肝病組，吲哚氰綠R15ICG呈逐漸升高的趨勢。(9)終末期肝病組Child-PughA級7例，B級20例，C級6例；MELD評分＜15分9例，15至24分15例，≥25分9例。(10)各項CT研究指標(biāo)中，以

13、肝臟密度，門靜脈主干管徑以及PVP、HPI與肝功能Child-Pugh分級、MELD評分以及R15ICG的相關(guān)性最好。以ROC曲線判斷得到的最佳臨界點HPI=43.92％作為終末期肝病的診斷閾值，其敏感性和特異性分別為0.846，0.887，準(zhǔn)確性達(dá)0.826。(10)實驗組FPP與HAP、HPI，TTP正相關(guān)，r值分別為+0.263、+0.656，+0.563，與PVP、TLP呈負(fù)相關(guān)，r值分別為-0.816，-0.633，其中FPP

14、與PVP相關(guān)性最好。多元線性回歸分析，Stepwise逐步回歸將F檢驗統(tǒng)計量P＜0.05的變量納入回歸方程，而F檢驗統(tǒng)計量P＞0.05的變量則剔除出方程。
　　 結(jié)論：1.改良后的四氯化碳(CCL4)、苯巴比妥、無水乙醇＋高脂、低蛋白、低膽堿食物復(fù)合因素造模法可以成功建立小型豬終末期肝病實驗?zāi)Ｐ汀?.與正常對照組、輕度肝纖維化組及重度肝纖維化組/早期肝硬化組相比，終末期肝病組肝臟的體積、密度、門脈主干及分支管徑、血流灌注參數(shù)均發(fā)

15、生明顯的變化，而且與肝功能Child-Pugh分級、MELD評分及吲哚氰綠R15ICG均具有良好的相關(guān)性。3.logistic回歸分析提示肝臟體積、門脈主干管徑，HPI、PVP是評價小型豬終末期肝病的形態(tài)和功能學(xué)最有效指標(biāo)，以HPI=43.92％作為本研究組終末期肝病的診斷閾值，其敏感性和特異性分別為0.846，0.887，準(zhǔn)確性達(dá)0.826。4.終末期肝病MSCTP的PVP和HPI兩個變量建立起最優(yōu)的回歸方程：Y=17.175-0.1