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文檔簡介
1、肝癌是我國高發(fā)性惡性腫瘤,分布廣,轉(zhuǎn)移率高,其發(fā)生的分子機(jī)制尚不是很明確。目前,從信號(hào)傳導(dǎo)途徑來研究與治療癌癥已成為癌癥治療的新興領(lǐng)域。細(xì)胞因子通過與細(xì)胞上的特異性受體相結(jié)合,激發(fā)一系列的信號(hào)傳導(dǎo)途徑,并引起下游相關(guān)基因的表達(dá),從而影響細(xì)胞乃至組織的生物學(xué)功能效應(yīng)?,F(xiàn)有研究揭示,許多癌癥的發(fā)生與細(xì)胞內(nèi)相關(guān)信號(hào)途徑的異常激活或者失活相關(guān)。 STAT(Signaltransducerandactivatoroftranscripti
2、on)是存在于細(xì)胞質(zhì)中的一類潛在的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子。作為信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子,這類蛋白在細(xì)胞信號(hào)傳遞中起著承上啟下的作用,在細(xì)胞的生長、存活、增殖和分化中起著非常重要的作用。研究表明,STAT3的持續(xù)激活與許多腫瘤和癌癥相關(guān),如黑色素瘤、骨髓瘤、急慢性白血病、頭頸癌、乳腺癌、前列腺癌、小細(xì)胞癌等。 本文選取了信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子STAT3為研究對(duì)象,研究了肝癌細(xì)胞BEL-7402中STAT3的異?;罨捌鋵?duì)細(xì)胞遷移的作
3、用,并研究了肝癌細(xì)胞HepG2中STAT3途徑與WNT信號(hào)途徑中β-Catenin的相互關(guān)系以及嘗試用STAT3RNA干擾方法研究STAT3的功能,試圖在細(xì)胞水平上研究尋找治療肝癌的方法。 1.成功構(gòu)建了綠色熒光蛋白(GFP)標(biāo)記的STAT3野生型(WT)/突變體(CYF)融合質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)入細(xì)胞,以熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)驗(yàn)證了融合蛋白的活性;通過測定綠色熒光為標(biāo)記的細(xì)胞遷移距離的方法證實(shí),過表達(dá)野生型STAT3對(duì)肝癌細(xì)胞系BEL-74
4、02細(xì)胞遷移有促進(jìn)作用,而突變體STAT3能夠降低癌細(xì)胞的遷移。 2.利用細(xì)胞的免疫組化雙色染色和蛋白免疫沉淀的方法證實(shí)STAT3與β-catenin可以形成復(fù)合物,隨著細(xì)胞密度的增加,STAT3與野生型β-catenin形成的復(fù)合物含量減少。但利用熒光素酶活性分析方法發(fā)現(xiàn)STAT3對(duì)β-catenin轉(zhuǎn)錄激活活性沒有明顯的影響。實(shí)驗(yàn)表明,STAT3信號(hào)途徑與β-catenin信號(hào)途徑之間很有可能存在著一定的內(nèi)在聯(lián)系。
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