金絲桃苷對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其BK通道作用機(jī)制.pdf

1、目的：
　　探討線栓法制備小鼠局灶性腦缺血再灌注模型成功的兩種評(píng)價(jià)方法間的相關(guān)性，為評(píng)價(jià)該模型提供一種新的方法和標(biāo)準(zhǔn)。觀察金絲桃苷(Hyp)對(duì)大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用，以及 BK通道在Hyp抗腦缺血再灌注損傷中的作用，探討Hyp抗缺血性腦損傷作用的機(jī)制。
　　方法：
　　1.20只雄性KM小鼠，隨即分為模型組(n=10)、假手術(shù)組(n=10)，采用線栓法阻塞大腦中動(dòng)脈建立局灶性腦缺血再灌注模型，分別于術(shù)前、

2、缺血即刻、缺血2 h、再灌注即刻、再灌注24 h利用激光散斑成像技術(shù)監(jiān)測(cè)各組小鼠腦血流量變化，再灌注24 h后進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分，并行TTC染色法檢測(cè)腦梗死體積百分比，相關(guān)性分析判斷腦血流量變化與梗死體積百分比之間的相關(guān)性。
　　2.使用線栓法制備大鼠右側(cè)大腦中動(dòng)脈阻塞致局灶性腦缺血再灌注模型。雄性 SD大鼠隨機(jī)分為：假手術(shù)組組、模型組、Hyp(12.5,25,50mg/Kg)組和陽性藥銀杏葉提取物組。術(shù)前灌胃給藥3天。激光散斑成像

3、技術(shù)分別于術(shù)前、術(shù)后即刻、缺血2h、再灌注即刻、再灌注24h監(jiān)測(cè)腦血流變化；缺血2h再灌注24h后，觀察神經(jīng)功能損傷，TTC染色法檢測(cè)腦梗死體積；
　　3.檢測(cè)血清中SOD、MDA含量；
　　4. RT-PCR檢測(cè)神經(jīng)元中BK-α、BK-β4、PKC-αmRNA表達(dá)水平；
　　5. Western blot檢測(cè)神經(jīng)元中BK-α、BK-β4、PKC-α和腦血管平滑肌中BK-β1亞基蛋白表達(dá)情況；
　　結(jié)果：

4、　　1.與假手術(shù)組相比，模型組小鼠出現(xiàn)明顯的神經(jīng)功能異常，TTC染色顯示出明顯的腦梗死，梗死側(cè)腦血流量明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。缺血即刻、缺血2 h小鼠腦血流量變化與再灌注24 h腦梗死體積的相關(guān)系數(shù)R2值分別為0.55、0.28(P<0.05)。
　　2.與假手術(shù)組相比，模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分值明顯升高(P<0.01)；與模型組相比，Hyp低、中、高劑量組、GBE組均可降低其神經(jīng)功能評(píng)分（P<0.05,P<0.

5、01）。與假手術(shù)組比較,模型組大鼠局部腦血流顯著下降,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，再灌注即刻、再灌注24h，Hyp各劑量組大鼠局部腦血流均有不同程度升高,其中，再灌注24h，Hyp中、高劑量組血流值恢復(fù)最高(P<0.05,P<0.01)。與假手術(shù)組相比，模型組大鼠可見明顯的梗死(P<0.01)；與模型組相比，金絲桃苷低、中、高劑量組、GBE組均可降低腦梗死體積(P<0.05,P<0.01)。
　　3.與假手術(shù)組相比，模型組大鼠血

6、清MDA值明顯升高、SOD值明顯降低(P<0.05,P<0.01)。金絲桃苷低、中、高劑量組及GBE組均顯著降低血清中MDA含量，升高SOD含量，與模型組相比，差異有顯著性(P<0.05,P<0.01)。
　　4. RT-PCR結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠腦組織中神經(jīng)元BK-α、PKC-α基因表達(dá)顯著下降(P<0.05)，BK-β4基因表達(dá)顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，Hyp低、中、高劑量組可顯著增加BK-α表達(dá)

7、(P<0.01)，Hyp低、中、高劑量組、GBE組可明顯降低BK-β4基因表達(dá)(P<0.01)，Hyp低、中、高劑量組、GBE組可顯著增加PKC-α基因表達(dá)(P<0.01)。
　　5. Western blot結(jié)果顯示，與假手術(shù)組比較，模型組大鼠神經(jīng)元中 BK-α、PKC-α表達(dá)顯著下降(P<0.05)，BK-β4表達(dá)顯著升高(P<0.01)。與模型組相比，Hyp中、高劑量組可顯著增加BK-α表達(dá)(P<0.01)，Hyp低、中、高

8、劑量組、GBE組可明顯降低 BK-α4表達(dá)(P<0.01)，顯著增加 PKC-?蛋白表達(dá)(P<0.01)。與假手術(shù)組相比，模型組大鼠腦血管平滑肌中BK-β1表達(dá)顯著下降(P<0.01)。與模型組相比，Hyp中、高劑量組可顯著增加BK-α1蛋白表達(dá)(P<0.05,P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1.缺血即刻的皮層血流變化與梗死體積具有較好的線性相關(guān)。小鼠腦血流量變化是除神經(jīng)功能評(píng)分和腦梗死體積以外另一種可判斷小鼠局灶性腦缺血