侵染梨的果生炭疽菌(Colletotrichum fructicola)兩個不同致病型菌株侵染特性的研究.pdf

1、近年來我國南方梨區(qū)早期異常落葉的發(fā)生普遍，造成的損失十分嚴(yán)重。本實(shí)驗(yàn)室前期對造成梨早期落葉的病原菌進(jìn)行系統(tǒng)鑒定，證實(shí)該病系由果生炭疽菌（Colletotrichum fructicola）侵染所致，同時發(fā)現(xiàn)，該菌在田間的癥狀表現(xiàn)存在有兩種類型，Ⅰ型產(chǎn)生不擴(kuò)展的黑色斑點(diǎn)癥狀，Ⅱ型產(chǎn)生可擴(kuò)展的壞死斑癥狀。本研究選取來源于兩種不同癥狀類型的代表菌株F J-85（產(chǎn)生黑點(diǎn)癥狀）和菌株FJ-11-2（產(chǎn)生壞死斑癥狀），比較兩個菌株有性態(tài)與無性態(tài)的

2、癥狀表現(xiàn)，并利用熒光標(biāo)記和組織染色方法顯微觀察這兩種不同致病型菌株的侵染過程，為探討果生炭疽菌的致病機(jī)制和解析果生炭疽菌在我國梨上的致病多樣性提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。取得的主要研究結(jié)果如下:
　　1.兩個不同致病型菌株子囊孢子單孢菌系的生物學(xué)特性及致病性研究。以梨果生刺盤孢的兩種致病型菌株FJ-85（產(chǎn)生黑點(diǎn)癥狀）和菌株FJ-11-2（產(chǎn)生壞死斑癥狀）為材料，研究發(fā)現(xiàn)這兩個菌株的子囊孢子單孢培養(yǎng)均可產(chǎn)生正、負(fù)兩種類型的單孢菌系，正型單孢

3、菌系菌落淺白色，其上形成的子囊孢子再培養(yǎng)，可形成正、負(fù)兩種類型的單孢菌系。負(fù)型單孢菌系菌落深灰色，其上形成的子囊孢子再培養(yǎng)，只形成負(fù)型一種單孢菌系。兩個菌株的單孢菌系中，負(fù)型的比例明顯多于正型。兩種類型的單孢菌系對峙培養(yǎng)，在菌落內(nèi)及菌落交界處均可形成子囊殼，而同種類型的單孢菌系對峙培養(yǎng)僅在菌落內(nèi)產(chǎn)生子囊殼。結(jié)果表明同種類型的單孢菌系可同宗配合，而正、負(fù)兩種類型的單孢菌系還可異宗配合。正型單孢菌系的致病力與原始菌株相近，而負(fù)型單孢菌系較原

4、始菌株弱。兩個菌株的單孢菌系在翠冠梨上引起的癥狀差異與其原始菌株相同。
　　2.兩個不同致病型菌株GFP轉(zhuǎn)化體系的建立。利用ATMT法對兩個致病型菌株F J-85和FJ-11-2進(jìn)行GFP標(biāo)記，選取并測定轉(zhuǎn)化子的熒光穩(wěn)定性和潮霉素B抗性，并通過分子方法檢測轉(zhuǎn)化子中的hph和gfp基因。通過比較野生型菌株和轉(zhuǎn)化子的菌落形態(tài)、生長速率和和致病力，篩選出與野生型較一致的轉(zhuǎn)化子FJ-85-24和FJ-11-2-39。
　　3.兩個不

5、同致病型菌株GFP轉(zhuǎn)化子對梨葉侵染的顯微觀察。用轉(zhuǎn)化子菌株FJ-85-24和FJ-11-2-39的分生孢子懸浮液，在翠冠梨葉上無傷和針刺接種后定期進(jìn)行顯微觀察。結(jié)果顯示，接種菌株FJ-85-24后，在黑點(diǎn)癥狀部位可以看到附著胞附著在葉片表面，黑點(diǎn)癥狀周圍細(xì)胞出現(xiàn)明顯的防衛(wèi)反應(yīng)，但未看到明顯的侵染菌絲在葉片內(nèi)部的擴(kuò)展，懷疑黑點(diǎn)癥狀可能是由附著胞在侵染中產(chǎn)生的某種次生代謝產(chǎn)物與寄主進(jìn)行非親和互作而引起過敏性壞死反應(yīng)。而菌株FJ-11-2-3

6、9的附著胞在葉片上并未顯癥而是以附著胞形式潛伏侵染。在發(fā)病后期兩個菌株均會在葉片角質(zhì)層下形成大量子囊殼。通過兩個轉(zhuǎn)化子的分生孢子液無傷和針刺接種豐水梨葉后發(fā)現(xiàn)，癥狀出現(xiàn)明顯較早，且壞死部位可以看到菌絲的擴(kuò)展。熒光顯微鏡下觀察到葉片柵欄組織與海綿組織之間的組織壞死，但并未觀察到菌絲在病組織內(nèi)的擴(kuò)展情況。
　　4.兩個不同致病型菌株侵染梨葉的組織染色法觀察。在梨葉上接種菌株FJ-85和FJ-11-2的分生孢子，觀察發(fā)現(xiàn)二者具有相同的萌