含Ⅰ型血小板反應(yīng)蛋白的解聚素和金屬蛋白酶-12基因多態(tài)性與大動脈粥樣硬化型腦梗死的關(guān)系.pdf

1、研究背景:腦血管病已經(jīng)成為中國的第一大死亡和致殘原因，目前中國有超過7，000，000的卒中患者，其中70％是缺血性卒中。腦梗死(Cerebral infarction，CI)是一種多因素復(fù)雜疾病，涉及遺傳因素和環(huán)境因素。各遺傳因素在腦梗死的發(fā)生發(fā)展所起的作用與具體亞型密切相關(guān)。探索亞型特異性易感基因已成為國際熱點。大動脈粥樣硬化（large artery atherosclerotic，LAA）型腦梗死是缺血性卒中的最常見類型，致死致

2、殘率極高。最近的研究發(fā)現(xiàn)，多種基質(zhì)金屬蛋白酶（matrix metalloproteinases，MMPs）通過降解細(xì)胞外基質(zhì)，形成不穩(wěn)定的大動脈粥樣硬化，進一步觸發(fā)急性腦血管事件。含Ⅰ型血小板反應(yīng)蛋白的解聚素和金屬蛋白酶(a disintegrin and metalloproteinase with thrombospondinmotifs，ADAMTS)是繼基質(zhì)金屬蛋白酶后新發(fā)現(xiàn)的一類Zn2+依賴的分泌型金屬蛋白酶家族。該家族在保

3、持凝血系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)、炎癥反應(yīng)調(diào)節(jié)、血管生成和器官發(fā)育等方面發(fā)揮著重要的作用。作為ADAMTS家族的一員，ADAMTS-12能夠降解細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)，并且能特異性的降解軟骨基質(zhì)蛋白(Cartilage oligomeric matrix protein，COMP)，解除COMP對于血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)的遷移和粘附的抑制作用。從而導(dǎo)致

4、內(nèi)膜增厚，加速斑塊形成及易損性增加，促進急性腦梗死發(fā)生。進來研究發(fā)現(xiàn)，ADAMTS-12基因多態(tài)性與小兒卒中、精神分裂癥等相關(guān)。但目前尚無關(guān)于ADAMTS-12基因多態(tài)性與大動脈粥樣硬化型腦梗死的關(guān)系的報道。
　　研究目的:探討含Ⅰ型血小板反應(yīng)蛋白的解聚素和金屬蛋白酶-12(adisintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs12,ADAMTS-12)基因rs2

5、5754(T/C)位點、 rs6865176(A/G)位點、rs79110681(A/G)位點、rs185365(T/G)位點、rs457353(A/C)位點多態(tài)性多態(tài)性與急性大動脈粥樣硬化（large artery atherosclerotic，LAA）型腦梗死的關(guān)系，篩選出急性大動脈粥樣硬化型腦梗死易感基因，早期篩選出腦梗死高危人群，降低腦梗死的致殘率和致死率。
　　實驗方法:嚴(yán)格按照納入標(biāo)準(zhǔn)及排除標(biāo)準(zhǔn)連續(xù)收集首次因腦梗死住

6、院的患者396例及同期健康體檢者318例。收集納入人群血液標(biāo)本提取DNA，利用聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)擴增基因目的片段后，采用直接基因測序法測定ADAMTS-12基因rs25754(T/C)位點、rs6865176(A/G)位點、rs79110681(A/G)位點、rs185365(T/G)位點、rs457353(A/C)位點多態(tài)性，同時收集納入人群的臨床相關(guān)數(shù)據(jù)，采用SPSS18.0對數(shù)據(jù)進行系統(tǒng)分析，計量資料采用兩獨立樣本t檢驗;計數(shù)資料采

7、用四格表卡方檢驗，以95％CI可信區(qū)間（confidence interval，CI）及比值比(odds ratio，OR)表示相對風(fēng)險度;采用Logistic回歸篩選獨立危險因素;采用Haploview4.2軟件進行基因型、等位基因頻率、Hardy-Weinberg平衡檢驗及單倍體型分析;P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　實驗結(jié)果: rs25754、rs185365和rs457353位點兩兩之間分別存在完全連鎖不平衡(D'=

8、1.0，r2=1.0)。rs25754等位基因T在腦梗死組和對照組中分布頻率分別為82.2％和77.5％，分布差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=4.852，P=0.028），且腦梗死組中(TT+TC)基因型多于對照組（x2=5.000，P=0.025）。rs185365等位基因T分布頻率在腦梗死組中占82.2％高于對照組中所占77.5％，分布差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（2=4.852，P=0.028），且腦梗死組中(TT+TG)基因型多于對照組(x2=

9、5.000，P=0.025)。rs457353在腦梗死組和對照組中分布頻率分別為82.2％和77.5％，分布差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（x2=4.852，P=0.028），且腦梗死組中(TT+TC)基因型多于對照組(x2=5.000，P=0.025)。rs6865176和rs79110681等位基因頻率和基因型在兩組間無顯著差異（P＞0.05）。在單倍體分析中，單倍體分析中，根據(jù)連鎖不平衡分析結(jié)果構(gòu)建了模塊1（rs25754-rs185365-

10、rs457353），共發(fā)現(xiàn)2個單倍體型。單倍體型H1(T-T-A)的OR值為1.339(x2=4.852，P=0.0276)，H2(C-G-C)的OR值為0.747（x2=4.852，P=0.0276）。多因素Logistic回歸分析中，分析篩選出高血壓病史、吸煙史、基因型(rs25754/rs185365/rs457353:TT+TC/TT+TG/TT+TG)、空腹血糖、同型半胱氨酸是急性大動脈粥樣硬化性腦梗死的獨立危險因素。