溫腎方對(duì)亞臨床甲狀腺功能減退大鼠模型心臟損害的防治作用機(jī)理研究.pdf

1、目的:目前對(duì)于“是否需要治療亞臨床甲狀腺功能減退,該如何治療?”,仍存在較大爭(zhēng)議。中醫(yī)藥以其獨(dú)特的理論體系應(yīng)用在亞臨床甲狀腺功能減退的臨床治療上取得了一定效果。本課題擬以中醫(yī)古籍理論為基礎(chǔ),結(jié)合導(dǎo)師陳如泉教授的臨證經(jīng)驗(yàn),采用“甲狀腺全切術(shù)+術(shù)后皮下注射L-T4”的方法制備亞臨床甲狀腺功能減退大鼠模型,觀察亞臨床甲狀腺功能減退對(duì)心臟結(jié)構(gòu)及功能的影響,探討溫腎方對(duì)亞臨床甲狀腺功能減退大鼠模型心臟損害的防治作用及其相關(guān)作用機(jī)制。為中藥治療亞臨

2、床甲狀腺功能減退提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),提出用溫陽(yáng)補(bǔ)虛法治療亞臨床甲狀腺功能減退的理論。
　　 方法:(1)翻閱古籍經(jīng)典,結(jié)合近現(xiàn)代關(guān)于亞臨床甲狀腺功能減退的臨床觀察及實(shí)驗(yàn)研究成果,從腎陽(yáng)虛角度立論探討亞臨床甲狀腺功能減退的辨治方法。(2)跟師臨床,總結(jié)導(dǎo)師陳如泉教授辨治亞臨床甲狀腺功能減退的辯證思路及用藥規(guī)律。(3)采用“甲狀腺全切術(shù)+術(shù)后皮下注射L-T4”法制備亞臨床甲狀腺功能減退大鼠模型,設(shè)定空白對(duì)照組、模型組、中藥低劑量組、西藥組

3、、中+西藥組及中藥高劑量組,空白對(duì)照組和模型組每日灌服蒸餾水5ml/kg,中藥低劑量組每日按中藥低劑量組予以溫腎方藥液,用量為11.25g/kg·d;西藥組予以L-T4片混懸液,用量為4.5μg/kg·d;中+西藥組予以溫腎方藥液(11.25g/kg·d)和小量L-T4混懸液(2.25μg/kg·d);中藥高劑量組予以溫腎方藥液(16.88g/kg·d,即中藥低劑量組的1.5倍)。共灌胃30天。灌胃期大鼠飼料及飲用水,L-T4針劑處理同

4、前。灌胃期間觀察大鼠體重、活動(dòng)、皮色及大便等情況。第31天處死大鼠,處理方法如下:腹主動(dòng)脈取血用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血清FT3、FT4及TSH水平,剖胸取心臟組織用ELISA法參照組織T3試劑盒說(shuō)明測(cè)定心肌組織T3水平、甲狀腺激素受體表達(dá)水平、心肌肌球蛋白重鏈基因表達(dá)、心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度及細(xì)胞凋亡,觀察心肌組織病理形態(tài)學(xué)變化,同時(shí)觀察溫腎方對(duì)其指標(biāo)的干預(yù)情況。
　　 結(jié)果:(1)不論先天稟賦還是后天失調(diào),失治誤治導(dǎo)致的腎陽(yáng)虧虛均有可

5、能導(dǎo)致亞臨床甲狀腺功能減退的發(fā)生及發(fā)展,提供從腎陽(yáng)虛角度辨治亞臨床甲狀腺功能減退的理論依據(jù)。
　　 (2)導(dǎo)師陳如泉教授從腎陽(yáng)虛辨治亞臨床甲狀腺功能減退,運(yùn)用溫陽(yáng)補(bǔ)腎藥物治療亞臨床甲狀腺功能減退也可取得較好療效。
　　 (3)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):與空白對(duì)照組比較,各治療組體重均有增加(P＜0.01);與模型組比較,西藥組、中+西藥組及中藥高劑量組體重增加較多,具有顯著意義(P＜0.01);與中藥低劑量組比較,西藥組及中藥高劑量

6、組體重有所增加(P＜0.05),中+西藥組體重變化則具有顯著意義(P＜0.01)。各治療組中FT3及FT4較空白對(duì)照組變化無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);與模型組比較,各治療組TSH均有所降低,具有顯著意義(P＜0.01),與空白對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 (4)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):與空白對(duì)照組比較,模型組心肌組織T3顯著降低(P＜0.01);與模型組比較,中藥高劑量組心肌組織T3水平顯著升高(P＜0.05);中藥高

7、劑量組心肌組織T3水平接近于空白對(duì)照組(P＞0.05)。與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠心肌組織中甲狀腺激素受體亞型Tα1、Tβ1表達(dá)顯著降低,Tα2表達(dá)顯著增加,(P＜0.01);與模型組比較,中+西藥組大鼠心肌組織中甲狀腺激素受體亞型Tα1、Tβ1。表達(dá)增加(P＜0.05);Tα2表達(dá)降低(P＜0.05);中藥高劑量組在下調(diào)Tα2表達(dá),上調(diào)Tβ1表達(dá)方面有效(P＜0.05);中+西藥組及中藥高劑量組心肌甲狀腺激素受體Tα2、Tβ1表達(dá)水

8、平接近于空白對(duì)照組(P＞0.05),中+西藥組在Tα1表達(dá)調(diào)節(jié)上優(yōu)于中藥高劑量組。
　　 (5)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠心肌肌球蛋白重鏈α-MHCmRNA表達(dá)降低(P＜0.05),β-MHCmRNA表達(dá)顯著增加,(P＜0.01);與模型組比較,中+西藥組和中藥高劑量組在上調(diào)大鼠心肌α-MHCmRNA表達(dá),下調(diào)大鼠心肌β-MHCmRNA表達(dá)方面效果明顯(P＜0.05);中+西藥組及中藥高劑量組心肌α-MHCmRN

9、A、β-MHCmRNA表達(dá)水平接近于空白對(duì)照組(P＞0.05)。
　　 (6)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠心肌羥脯氨酸、膠原蛋白含量降低(P＜0.01);與模型組比較,西藥組、中+西藥組和中藥高劑量組心肌羥脯氨酸、膠原蛋白含量明顯增高(P＜0.01);中藥高劑量組心肌羥脯氨酸及膠原蛋白水平接近于空白對(duì)照組(P＞0.05)。大鼠心肌組織在×400放大后,HE染色后顯示空白對(duì)照組心肌細(xì)胞排列整齊,橫紋清楚。與空白對(duì)照組

10、相比較模型組大鼠心肌細(xì)胞排列紊亂,部分細(xì)胞腫脹明顯;中藥低劑量組大鼠心肌細(xì)胞病理變化介于二者之間,可見(jiàn)少量腫脹肌細(xì)胞;西藥組、中+西藥組及中藥高劑量組大鼠心肌病理變化接近空白對(duì)照組?？瞻讓?duì)照組大鼠心肌組織在透射電鏡下可見(jiàn)細(xì)胞核未見(jiàn)明顯改變,胞質(zhì)中膠原纖維排列良好,肌節(jié)中各帶明顯,線粒體不腫脹,肌質(zhì)網(wǎng)不擴(kuò)張;模型組大鼠心肌組織中心肌細(xì)胞核不規(guī)則,染色質(zhì)邊集,胞質(zhì)中線粒體明顯腫脹,線粒體嵴損傷、斷裂,形成不規(guī)則的增大的間隙,線粒體基質(zhì)溶解,

11、肌質(zhì)網(wǎng)腫脹,可見(jiàn)肌節(jié),但肌節(jié)中各帶不明顯;中藥低劑量組大鼠心肌組織中細(xì)胞核輕度不規(guī)則收縮,核周間隙增大,細(xì)胞質(zhì)中肌原纖維未見(jiàn)明顯改變,部分線粒體輕度腫脹,嵴間隙增寬,糖原減少或消失,肌質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張;西藥組、中+西藥組及中藥高劑量組大鼠心肌組織中細(xì)胞核不規(guī)則,核周間隙局部增大。胞質(zhì)中肌原纖維排列良好,肌節(jié)尚明顯,肌節(jié)中各帶不明顯,線粒體不腫脹,肌質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張。
　　 (7)與空白對(duì)照組比較,模型組心肌細(xì)胞Ca2+濃度顯著升高(P＜

12、0.01);與模型組比較,中藥高劑量組心肌細(xì)胞Ca2+濃度降低(P＜0.05);中藥高劑量組心肌細(xì)胞Ca2+濃度接近于空白對(duì)照組(P＞0.05)。大鼠心肌組織切片,染色標(biāo)記后在×400放大后,模型組可見(jiàn)棕黃色細(xì)胞核明顯增多,空白對(duì)照組偶見(jiàn),中藥低劑量組及西藥組顆粒低、中+西藥組及中藥高劑量組均較少。
　　 結(jié)論:腎陽(yáng)虛是亞臨床甲狀腺功能減退的病理基礎(chǔ),因此應(yīng)用溫陽(yáng)補(bǔ)腎藥物能夠治療亞臨床甲狀腺功能減退。從導(dǎo)師陳如泉教授臨床辨治亞臨

13、床甲狀腺功能減退角度進(jìn)一步證實(shí)溫陽(yáng)補(bǔ)腎藥物能夠治療亞臨床甲狀腺功能減退。實(shí)驗(yàn)研究證明亞臨床甲狀腺功能減退引起心肌組織T3水平的降低和甲狀腺激素受體基因的異常表達(dá),影響心肌肌球蛋白重鏈基因表達(dá),改變心肌組織膠原含量及心肌細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度,從而影響心肌組織結(jié)構(gòu)及舒縮功能。溫腎方能夠在一定程度上逆轉(zhuǎn)這些變化,在治療亞臨床甲狀腺功能減退的基礎(chǔ)上溫腎方能能顯著改善亞臨床甲狀腺功能減退模型大鼠的體重、活動(dòng)等一般狀況,還能在不升高血清FT1及FT4的