低分子量肝素鈉口服給藥系統(tǒng)的研究——納米乳及腸粘附貼的研制.pdf

1、大分子藥物由于口服吸收具多重屏障，絕大多數(shù)只能以注射途徑給藥，故患者順應(yīng)性差。本文選擇預(yù)防和治療血栓栓塞性疾病的低分子量肝素鈉(LMWH)作為模型藥物，探討改善大分子藥物口服生物利用度的方法。在總結(jié)肝素和LMWH口服吸收已有研究基礎(chǔ)上，結(jié)合LMWH口服吸收促進(jìn)劑的篩選，本文研制了LMWH兩種新型口服給藥系統(tǒng)一納米乳和腸粘附貼。首次以促吸收為出發(fā)點(diǎn)，結(jié)合相圖研究，著重從消化角度確立了可完全消化的LMWH口服納米乳處方，在體和體內(nèi)試驗(yàn)取得了

2、良好的效果。首次應(yīng)用小片工藝制備了LMWH腸粘附貼，體外試驗(yàn)初步表明具有良好的促LMWH腸吸收作用。本研究為開(kāi)發(fā)LMWH口服制劑奠定基礎(chǔ)并拓展了納米乳和腸粘附貼在大分子藥物口服給藥上的應(yīng)用。 首先建立了利用天青A染料以可見(jiàn)分光光度法測(cè)定腸滲透液中LMWH濃度的方法。以外翻腸囊法研究LMWH經(jīng)大鼠各腸段的滲透順序?yàn)槭改c≥空腸>回腸>結(jié)腸；LMWH腸滲透機(jī)制為被動(dòng)擴(kuò)散；各吸收促進(jìn)劑增加LMWH空腸滲透的強(qiáng)弱順序?yàn)椋?3mMSNA

3、C>0．5％Imwitor742~10mMNaGC>13mMNaCap>15mMNaTC>15mMNaOA>1％Tween80。 以W／O型納米乳載水量10％以上為目標(biāo)，通過(guò)相圖研究表明中鏈三甘酯Miglycol812N較長(zhǎng)鏈甘油酯更容易形成W／O型納米乳；在Miglycol812N／Surfactant／Imwitor742，Km為1條件下，表面活性劑Tween80、CremophorEL和TPGS均能在Miglycol812

4、N含量50％或60％時(shí)形成載水量符合要求的納米乳；在Miglycol812N／Tween80／Cosuffactant，Km為1條件下，助表面活性劑PEG400、丙二醇和Imwitor742均能在Miglycol812N含量50％或60％時(shí)形成載水量符合要求的納米乳；在Miglycol812N／Tween80／Imwitor742條件下，Km為1或0．5均能在Miglycol812N含量50％或60％時(shí)形成載水量符合要求的納米乳。以上結(jié)

5、果表明，僅以相圖上W／O型納米乳載水量大小(或納米乳區(qū)面積大小)為依據(jù)難以對(duì)納米乳處方進(jìn)行有效篩選，故有必要從促吸收角度對(duì)納米乳處方作進(jìn)一步篩選，即利用納米乳油相一中鏈三甘酯的消化產(chǎn)物有利LMWH腸吸收而確定從消化速度和消化程度進(jìn)一步研究納米乳處方。 以堿滴定中和中鏈三甘酯酯解所釋放的脂肪酸來(lái)表征其消化速度和程度。通過(guò)考察膽鹽膠束種類(lèi)、緩沖溶液pH條件、胰脂酶濃度以及Ca2+濃度對(duì)Miglycol812N在30min內(nèi)酯解速度和

6、程度的影響來(lái)選擇體外消化條件，確立體外消化模型為：50mMTrizmamaleate、150mMNaCl和5mMCa2+構(gòu)成緩沖系統(tǒng)并調(diào)節(jié)pH為7．5；5mMNaTDC和1．25mMPC組成膽鹽膠束；胰脂酶濃度為200U／mi。上述條件構(gòu)成的體外消化體系較為溫和，有助于鑒別影響納米乳消化的處方因素。 以體外消化模型對(duì)影響納米乳消化的各處方因素進(jìn)行詳盡考察。結(jié)果表明，中鏈甘油酯酯解于單位時(shí)間釋放的脂肪酸摩爾量是長(zhǎng)鏈甘油酯的5-7倍

7、。表面活性劑均不同程度抑制中鏈三甘酯的酯解，其強(qiáng)弱順序?yàn)镃remophorEL>TPGS>Tween80>Labrasol：隨著Tween80與Miglycol812N比例增加，Miglycol812N酯解受抑制程度也增強(qiáng)。助表面活性劑對(duì)Miglycol812N酯解的影響各有不同，乙醇和PEG400降低其酯解速度和程度，TranscutlP和Imwitor742加快、丙二醇減慢其酯解速度。只有Imwitor742對(duì)Tween80／Mig

8、lycol812N(1／1)的消化有恢復(fù)作用，Imwitor742／Tween80比例越高，體系消化也越快，當(dāng)Imwitor742／Tween80比例為1時(shí)，體系消化速度甚至超過(guò)Miglycol812N自然酯解速度。固定Imwitor742／Tween80(1／1)條件下，變動(dòng)Miglycol812N比例不影響消化速度，但Miglycol812N含量較低時(shí)消化程度會(huì)有所降低。 通過(guò)上述影響納米乳消化的處方因素考察結(jié)果，對(duì)以Twe

9、en80為表面活性劑的各相圖進(jìn)行消化速度和程度的推斷，只有在Miglycol812N／Tween80／Imwitor742，Km為1或0．5的相圖中，對(duì)于載水量10％以上的納米乳處方，其消化速度均可超過(guò)Miglycol812N自身酯解速度，處方中中鏈三甘酯含量越高，消化程度也越完全，釋放辛／癸酸和辛／癸酸單甘酯等促吸收成分的量也越多，則促進(jìn)大分子藥物腸吸收的程度就越高。本研究首次以促吸收為出發(fā)點(diǎn)，結(jié)合相圖著重從消化角度指導(dǎo)W／O型納米乳

10、的處方篩選，可為大分子藥物口服設(shè)計(jì)出可完全消化或不可消化的納米乳處方。 依據(jù)上文研究結(jié)果設(shè)計(jì)LMWH口服可消化納米乳(NE-D)和不可消化納米乳(NE-ND)。體外消化試驗(yàn)證實(shí)NE-D30min酯解率為后者7倍之多。兩種納米乳粒徑為25-30nm，在膽鹽膠束溶液稀釋下均轉(zhuǎn)相形成粒徑在200nm左右的O／W型普通乳劑；NE-D納米乳消化后所形成混合膠束粒徑為15．1nm。兩種LMWH納米乳溶出3min即可釋放90％的LMWH。

11、 翻轉(zhuǎn)腸囊實(shí)驗(yàn)顯示NE-D納米乳的完全消化產(chǎn)物一混合膠束在各稀釋倍數(shù)對(duì)LMWH腸滲透的促進(jìn)作用均顯著大于NE-ND納米乳不可消化的乳滴。兩者消化產(chǎn)物促吸收程度均隨稀釋倍數(shù)增加而減少。分別以L(fǎng)MWH50mg／kg的劑量對(duì)大鼠空腸給予LMWH溶液劑、含載體SNAC35mg的LMWH溶液劑、LMWH納米乳NE-D和NE-ND后，絕對(duì)藥理利用度分別為1．02％、13．24％、15．24％和4．91％；APTT最大值分別為27s、108．2s

12、、96．2s和48．4s。上述制劑以相同劑量經(jīng)大鼠灌胃后，絕對(duì)藥理利用度分別為0．74％、4．40％、8．89％和2．01％：APTr最大值分別為25．3s、55．2s、74s和35．8s。LMWH各制劑空腸給藥和灌胃給藥的藥理利用度大小均為可消化納米乳>載體SNAC>不可消化納米乳>溶液劑。LMWH各制劑灌胃給藥的藥理利用度及APTT最大值均小于空腸直接給藥，表明胃腸稀釋效應(yīng)會(huì)影響LMWH各制劑的口服效果?？诜d體SNAC受胃腸環(huán)境影

13、響較大。LMWH可消化納米乳藥理利用度為不可消化納米乳的3倍以上，表明納米乳的消化對(duì)于LMWH的口服吸收具有重要的促進(jìn)作用。推測(cè)納米乳NE-D消化產(chǎn)物一辛／癸酸鈉、辛／癸酸單甘酯與膽鹽膠束以及表面活性劑Tween80共同構(gòu)成復(fù)雜的混合膠束起主要的促吸收作用。以上結(jié)果表明，LMWH口服可消化納米乳是具潛在臨床應(yīng)用價(jià)值的LMWH口服給藥系統(tǒng)。 通過(guò)Caco-2細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證實(shí)癸酸鈉／癸酸單甘酯膠束在一定程度上可打開(kāi)細(xì)胞間緊密連接并增加F

14、D4的細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)；膽鹽膠束本身不影響透膜電阻(TEER)及FD4細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)，但可協(xié)同癸酸鈉／癸酸單甘酯膠束進(jìn)一步打開(kāi)緊密連接并使FD4的細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)一步提高；Tween80對(duì)上述作用沒(méi)有影響。還無(wú)法證實(shí)上述膠束對(duì)細(xì)胞膜的作用程度以及該膠束作用下跨細(xì)胞膜途徑對(duì)大分子水溶性物質(zhì)吸收的貢獻(xiàn)程度，有待于用膜片鉗技術(shù)進(jìn)行深入探討。 LMWH口服腸粘附貼是以粘附材料為小片骨架，結(jié)合腸貼原理設(shè)計(jì)而成的由片芯、阻水層和腸溶層構(gòu)成的小腸生物粘附系統(tǒng)。首

15、先初步篩選出粘附力最佳的Carbomer934P和剪切力最佳的CMC-Na2000cp為片芯粘附材料；通過(guò)單因素考察并確定片芯最佳處方和工藝如下：Carbomer934P與CMC-Na2000cp比例為1：1，厚度為1mm，直徑為3mm，硬度為4kg。以EC衣膜構(gòu)成腸貼的阻水層能有效阻止LMWH的釋放；以EudragitL100-55為腸溶衣層能實(shí)現(xiàn)定位于小腸部位的粘附；片芯含10％以下的吸收促進(jìn)劑一甘氨膽酸鈉不影響腸貼的粘附性能和釋放